细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】求助

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 45  5/5 ‹‹12345
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】求助

8s5g[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77636
精华 0
积分 469
帖子 538
信誉分 100
可用分 3626
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-19
状态 离线
41

发表于 2016-1-12 16:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1现在很多文献都说培养前脂肪细胞要加bfgf，好象是10ng ，还有胰岛素，地塞米松。可暂时没有bfgf，只加胰岛素，地塞米松可不可以啊
2还有bfgf，胰岛素，地塞米松都是促进前脂肪细胞转化为脂肪细胞。而培养脂肪细胞需要加吗？？？？？听说脂肪细胞很难贴壁，后天到我培养的时候真不知道会是什么样？？？
真是迷茫啊，drake015你要是养过脂肪细胞就好了。可以向你请教！
顶部
555444[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 118099
精华 1
积分 359
帖子 413
信誉分 102
可用分 2836
专家分 10
阅读权限 255
注册 2013-12-9
状态 离线
42

发表于 2016-1-12 16:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

没想到这么多人在谈脂肪细胞,真有点兴奋.我已经和脂肪细胞打了一年的交道,想简单谈一点
看大家的问题,觉得在动手实验前一定要多读文献,比如sun◎flower ,你如果要做脂肪,你必须要了解PPAR,C/REB等转录调空因子,否则....
GDPH的检测方法,据我所知没有试剂盒,但那只是个酶促反映,你买齐了低物,在加上分光光度计就可以了.
techteam ,对于细胞离心的问题,你应该清楚,不同的离心机g和 rpm是不一样的,你要根据自己的离心几计算,不过我觉得没必要, 一般离心10ml--15ml的<10MIN,1000RPM绝对没问题
至于原代培养的问题,第一,我觉得取样部位很重要,第二,消化法很不稳定,我推荐"植块法",简单高效,至于血清浓度,原代可以稍微高一些,15%甚至20%,中间可以低一些8%,5代后根据细胞状态,可能还需要在高一些!
顶部
ladyhuahua[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76658
精华 0
积分 984
帖子 1667
信誉分 100
可用分 9116
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-8
状态 离线
43

发表于 2016-1-12 16:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
脂肪基质细胞的培养国外技术已经比较成熟了
我已经做了2年

===============================================================================================================

那请问我培养的前脂肪细胞，总是在24h后有一层油膜，外界条件也没有问题，空培了也没问题，然后我就不知道怎么了，是细胞自己分泌的油脂吗？谢谢，谢谢啦~~~~~~·
顶部
vera+[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76438
精华 0
积分 506
帖子 711
信誉分 100
可用分 4361
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-5
状态 离线
44

发表于 2016-1-12 16:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

看到这个帖子真是好高兴，谢谢楼上各位！我也准备要开始培养人的原带脂肪细胞，不知大家有没有整理出来流程何条件可以分享一下呢？
顶部
33号[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 74277
精华 0
积分 549
帖子 757
信誉分 100
可用分 4611
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-9
状态 离线
45

发表于 2016-1-12 16:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
那请问我培养的前脂肪细胞，总是在24h后有一层油膜，外界条件也没有问题，空培了也没问题，然后我就不知道怎么了，是细胞自己分泌的油脂吗？谢谢，谢谢啦~~~~~~·

===============================================================================================================

我现在也在养前脂肪细胞，不过是大鼠的，这个油层是不是你离心的时候没有把消化的液体中的油层没有去掉啊？
关于离心转速问题，我用的是1200rpm，8min，每次滤液我都去少量用培养皿镜下观察过，还有大量细胞没有沉下来！是不是这个转速不行啊？我用的是消化液是I型胶原酶100mg+50mlPBS配置成的。消化时间是40min，但是第二天就发现细胞大量降解，不知道你有没有遇到过这种情况呢？
别让这个帖子沉下去啊！！！
顶部
 45  5/5 ‹‹12345