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标题:【求助】测细菌的最适生长温度和欧文氏菌情缘关系

大花猫bb[使用道具]
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发表于 2016-1-13 17:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】测细菌的最适生长温度和欧文氏菌情缘关系

我现在要测细菌的最适生长温度和欧文氏菌情缘关系很近，我想做24、26、28、30、32、34、36和38这8个温度范围，但是我们实验室摇床少，只有俩台可供我使用，所以每次做一个温度的话，所加入的种子液浓度很难控制在相同数量级上，所以邮同学建议我做平行试验，就是其他温度和38度同时加样、测定OD值，我想问下这样做可以吗？
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小妖精@[使用道具]
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发表于 2016-1-13 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

5ml的培养体积和100ml的条件相同吗？
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今生如此[使用道具]
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发表于 2016-1-13 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

条件是一样的，加样比都是1比100，9管在28度、180r/min培养，9管在30度/32度/34度/36度培养，在12h、18h和24h分别测OD600，但是俩个温度条件培养下所测得数据相比没多大差别，书上说植物病原细菌的最适温度为28-30，可测出来28度和32/34度差别不大，不知道是为什么
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钻石[使用道具]
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发表于 2016-1-13 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

还有我最开始是用的100毫升三角瓶，摇床培养24小时，OD600到1.7多；后来我用时光做，每只加5毫升LB培养基和50微升菌液，24小时后OD600才0.4多，我想请问，这是为什么
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大大[使用道具]
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发表于 2016-1-13 17:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

5ml和100ml分别是什么容器？如果与书上描述不一致，可能是在别的条件上为达到适宜条件，导致温度条件差异为体现出。
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qinqinai[使用道具]
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 小中大

【回复】

100ML是在250ML的三角瓶里，5ml是在大试管里，具体毫升数我忘了，我现在就像知道，用试管测和用三角瓶测那个更准确，文献俩个都有用
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发表于 2016-1-13 17:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

搖床要是不夠的話，可以分多輪做，你每做一輪，肯定有一個溫度下菌長得最好，那麼下一輪的時候你也把這個溫度的做上，然後依此類推。最好把每一輪的初始OD都調成一樣，這樣得到的結果應該是最理想的。
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yazi[使用道具]
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发表于 2016-1-13 17:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

必须是平行试验，而且每种必须活化到最佳生长状态，一般活化2次，每次时间一般为18-24小时，具体依细菌特性
2、测定OD值时，必须是具有同样的活化代数，如都是第二、三次活化后测定，因为活化代数不一样，最后在培养24小时后，繁殖的细胞数会差别很大，OD值当然会波动较大，这样实验就没有意义。
3、实验设计很好，如果没有现成的实验条件，可换换思路，比如可将细菌活化后定量，做成菌液，然后涂布在平板培养基上，在不同时间培养后，可粗略观察到生长状况，最后再在几个近似的温度上做系统筛选！
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malong[使用道具]
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发表于 2016-1-13 17:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

我也出现过这种问题，用试管（塑料、双扣的培养管）做的OD600只有锥形瓶的一半。原因可能是容器内空气含量、菌液培养时的混匀程度的区别吧。
后来我都用锥形瓶测得，发现10mL、20mL、50mL培养基测出来的OD600都是相似的，在可以接受的误差范围。似乎文献中用锥形瓶做的比较多，建议用锥形瓶。
不过只要前后一致，讲明条件应该都可以吧
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灵魂[使用道具]
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发表于 2016-1-13 17:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

个人建议你做好是用锥形瓶做，量要大一些：毕竟量大误差小，还有如果用摇床要注意摇床的转速，培养基使用的量，是用纱布还是用透气胶塞，锥形瓶还要统一大小。是否培养液接种量一致是同一个菌种，培养液接种前是否在37度培养箱提前30分钟预热。然后接种。操作过程的细微情况都很重要 注意控制
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