拉曼光谱

拉曼新手，许多问题困惑不解：
1、共聚焦拉曼光谱，50倍长焦，数值孔径0.5，激发波长514nm，请教各位高手激光光斑面积怎么计算的？最好列出式子讲解一下。2、单分子拉曼测试过程中是如何拍出hot spot的彩色照片的？
3、mapping 最多可以做多大的范围，最多可以分成多少个小块，还有需要多长时间?
4、在大量的单分子检测过程中的图谱，通常是怎么识别出有用的单分子拉曼图的，有专门的工具软件吗？机器有带吗？
5、还有一个问题就是单分子拉曼真的能测到吗，如果没有共振，cross section较小的那种？
求助高手，高手，高高手，万分感谢！

1.镜头分辨率由数值孔径决定，但是光斑大小除与数值孔径有关外，还与光斑本身的发散和大小有关，所以很难给你一个确定共识。但是可以给你提供一个方法来测，找一块边缘很整齐的硅片，然后对520.7的峰在硅片边缘mapping（用小步长），然后看强度的衰减即可算出。
2. Hot spot 尺度在纳米级别，准确的说一般的拉曼到不了这么高的分辨率。Horiba和ranishaw的也就1um，wintec的可以300nm左右。要想高的分辨率，做SNOM采集拉曼信号，然后对某个拉曼峰积分可以。
3. mapping可以随便多大范围，时间取决于你总共才的点的个数，看你的忍受能力了
4.机器不带，可以根据bleaching来看，单分子谱的显著特征。
5.单分子拉曼能测到，但是具体体系选择合适的探针。

、第一个问题不是很明白，能否再详细些，谢谢！
2、我主要做的是在ITO玻璃上以500纳米左右的PS小球为模板，并在空隙将沉积silica，移去PS球形成二氧化硅半球腔，在其内电沉积或化学沉积银纳米颗粒，然后在其上化学或物理吸附小分子，测定拉曼光谱。主要是想考察球腔对于拉曼信号的影响，请问使用共聚焦拉曼能够使光照射到腔底吗，会对散射光产生影响吗，我对其中能否有hot spot 很不确定，请问有没有什么建议？
3、假设我用6x6um大小，64x64,mapping可行吗，需要多久？
4、我想问的是有没有软件可以帮助我从众多的图中找出符合一定特征的图谱，而不用一个一个的看
再次感谢

把你用的仪器型号写出来，我可以根据你的型号回答你

HR800 国别厂家:法国JY 公司  购置日期：2006 年4 月 主要指标：激光器波长：633nm，514nm ， 拉曼位移范围：100-4000cm-1 ,光谱分辨率：1cm-1 ， 显微尺寸范围：≤ 1μm
谢谢！

06年的HR800，若果我没记错的话，显微镜用了奥林巴斯的BX41，不是真的共焦显微镜，分辨率很一般。
2、能够使光照射到腔底，建议你镀膜时50nm左右。你的hotspot不会再腔低，只会在某些表面粗糙的点或者腔体的边缘。
3、激光光斑1个um的话，小于0.5um的扫描步长其实没多少意义。你可以试试你的6x6um大小，30x30,主要扫描时吧refresh time改的长一点比如~30s，其次用D2的衰减片，不然，你的探针会被激光烧掉的。时间取决于每个点的采普时间，你可以用低目数的光栅，固定光栅位置在你感兴趣的光谱范围中心，这样会帮你节约点时间。
4、没用软件帮你挑，你可以用仪器的上的软件对某个峰的强度积分，然后仪器会给出二维的mapping图，你可以选择自己感兴趣的点。
我觉得你对surface plasmon并不是太了解，建议多看些偏理论的文献。另外这个课题即使做出来，也不会发多好的文章，说句实话。

谢谢！
这学期刚刚接触拉曼这东西，理论上真的有点一知半解，方向是老板定的，就我这个水平看不出是否有前途，基本的思路显然是不能动的，能否在此基础上有点建议，谢谢！

多谢指教
我也是想着先做做看，拉曼方面我是纯菜鸟，还请以后多多指教！再次表示感谢

激光光斑直径D＝1.22×激光波长/显微镜数值孔径

这是物镜的分辨率，跟光斑大小两码事