小中大【求助】峰形越来越差,柱压正常,请问原因
色谱条件为:
紫外吸收比较弱,
进样量比较大,为80ul.
色谱柱为月旭东xdb,c18,4.6*100um ,3.5um的色谱柱(PH范围为2-10),
流动相为甲醇:20mol磷酸缓冲盐(PH6.5)=5:95,
柱温30
做了10多批溶出曲线后峰形就逐渐变差,反冲色谱柱,压力比正着用压力要大些,
我的怀疑有三点
1.流动相PH高
2.流动相含水量少(不成立,应为同样材质的长色谱柱也用过,流动相中甲醇含量为15%,也出现这种情况)
3.胶囊壳进入色谱柱
现在正在用含有三氟乙酸的乙腈水反冲 过夜
各位也给个意见,希望大家讨论讨论