小中大虽然我的年纪不小,可是我用的色谱少。没见过大场面,没经过大风浪。
自从发了这个帖后,真正像一句歌词所说,“一天看几回,希望花开早”。
但是理睬我的人,只有一位。
于是我下定决心,自力更生,排除万难,去争取胜利。
这个东东不是显酸性,而且稀溶液PH值在2-3之间吗?算它PKa也在这附近,那么流动相的PH值要达到PKa+2,就得在2以下了,应该超出C18柱的适用范围。
一转念,大家不是说流动相PH值控制在PKa±2以外,化合物就能以一种形态存在,既然PKa+2不行,那么可以控制PH值PKa-2啊,即PH值是6-7之间,不知行不?上次单纯加三乙胺的试验,PH值也是在7左右,不是不行吗?也许缓冲溶液效果要好点,如果单纯加碱行的话,怎么会有那么多需要用到缓冲溶液的地方呢,肯定缓冲溶液有独特的效果的。于是决定配点PH值6.5的缓冲溶液试试。查了点资料,配了25mmol/LK2HPO4溶液,加磷酸、氢氧化钠调节,在酸度计的指示下,配制成功。然后按甲醇30缓冲盐70配制成流动相,上机。
嗯,结果很快出来了,嘿,峰是只有一个了,而且尖尖窄窄的,很好看。但是,问题又来了,出峰时间太快了,2.8分钟。于是,就配了个甲醇20缓冲盐80的流动相,再上机,2.8多点,2.9都不到,效果不明显。我们机器比较差劲的,没梯度洗脱的。试来试去,试了五六针,出峰时间不但没后推,却产生了一个新的问题,出的峰越来越拖尾了。
唉,今天算了,再查查资料吧。于是,拿甲醇10水90的流动相洗柱子,洗了约半小时,一个主任拿来一个样,叫我帮他打一下。这是一个打得很熟的样,流动相也现成。
柱子在甲醇10水90的流动相下洗了半小时,也应该差不多了吧,我想,于是换上这个样的流动相,这是一个不需缓冲盐的,甲醇50水50,我想这个流动相水的比例也蛮高的,也可洗掉缓冲盐的,走了又有30分钟左右,应该差不多,可以进样了吧,打开检测器、工作站,按下开始看看基线。
接下来的景象,把我惊呆了。哪里有什么基线,全是狂峰巨浪,一浪高过一浪,真正是“惊涛拍岸,卷起千堆雪”啊。那个峰一会儿高耸云霄,一会儿直抵深谷。
怎么办???柱子报废了?要卷铺盖了?要知道打硫酸盐这个样是我闹着玩的,单位并不要求打,这下出这样一个漏,报废了柱子,难到不引咎……,不敢想象,脸都吓青了。
唉,不管怎样,也要博一下,先缓住他们吧,这里再洗洗看,柱子不会这么不经用吧,缓冲盐大家都在用的,浓度也不是很高,有的书上50mmol/L都有,我才25mmol/L,PH值是用酸度计测的,也应该可靠,没有越轨行为呀,柱子难道就这样坏了?不可能吧?怀着忐忑的心情,那边跟他说,现在很忙的,结果要晚点才出来,这边看着工作站的图谱,还是一浪一浪的,心都提到嗓子眼了。渐渐地,渐渐地,峰小了,浪静了。一个半小时后,峰平浪静,湖面平静得像一面镜子,基线平得像…像…像什么呢,反正很平很平了,心情也很平很平了,卷起的铺盖重新铺上了,接下来,进送来的样,也轻松搞定了。
陆游说:“纸上得来终觉浅,绝知此事要躬行”。有首歌唱道:“不经历风雨,怎么见彩虹……”。
苯胺硫酸盐到底应该怎么打,还没搞定,东查西查,觉得在PH值6.5的基础上再加点十二烷基磺酸钠,延迟出峰时间,应该有用的。我准备试试,各位大侠给我点忠告吧!!!