小中大我没有什么特殊的方法,就是按照说明书做的。你既然提细胞能成功,提组织应该问题不大。加入异丙醇离心后我也能看见白色沉淀,好象没什么问题呀。RNA应该也能看见的。如果还没离心就看见沉淀就有问题了。不知你用的TRIZOL是那个公司的,会不会有问题。附上我的操作程序,不知对你有没有用。
大鼠放血处死后立即取胰腺和肺组织约50mg,迅速浸入液氮速冻,-70oC保存。
总RNA提取按照说明书所述方法并略做改动如下:取出冻存样本50mg,迅速转入预冷的研钵中,加入液氮,于研钵中研细。加入0.5mL Trizol继续研磨并与组织充分混合。将匀浆液转入1.5mL离心管中,-70oC保存待处理。
1) 将Trizol匀浆液解冻,4oC,12000g离心10分钟
2) 吸取上清液至另一离心管,15-30oC,放置5分钟
3) 加入氯仿0.1mL(1/5Trizol量),震荡15秒,15-30oC,放置10分钟。4oC,12000g离心15分钟
4) 吸取2/3上清,转至另一离心管
5) 加异丙醇0.25mL(1/3-1/2 Trizol量)沉淀RNA,轻轻颠倒混匀,15-30oC,放置10分钟。4oC,12000g离心10分钟
6) 弃上清,缓慢沿壁加75%乙醇700ul,轻轻颠倒洗管壁,小心弃乙醇
7) 重复清洗一次
8) 移液枪吸去所有上清,干燥沉淀5分钟
9) 加入20-50ul Rnase-free的蒸馏水完全溶解RNA沉淀,-70oC保存。
取2ul RNA溶液经2%琼脂糖凝胶电泳,鉴定RNA质量。取1ul RNA溶液100倍稀释,用核酸蛋白检测仪进行分析、定量。OD260/280<1.6者弃用,计算标本RNA浓度。