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以5倍浓度梯度稀释的样本的Ct值的差异在扩增效率是100%时为2.32，Ct值差异是否相近（即扩增曲线间隔均匀），决定了相关系数R是否接近于1，Ct值差异大小则决定了扩增效率的高低。以5倍梯度稀释样本来说，Ct差异大于2.32，则扩增效率小于100%，差异越大则扩增效率越小。差异小于2.32，则扩增效率大于100%。你这次实验的Ct值差分别为1.88、1.73、2.19、1.57，差异明显小于2.32，所以导致扩增效率大于100%。
从你的描述来看，个人认为是你的加样枪不准导致梯度样本稀释不准确，即实际样本梯度小于5倍，估计介于2倍到5倍之间。
