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标题:【求助】我做纳米粒子的细胞切片TEM

xiaoxiaoai[使用道具]
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【求助】我做纳米粒子的细胞切片TEM

我想问下,希望专家指导下,我做纳米粒子的细胞切片TEM ,在细胞与纳米粒子培养的过程中,可能纳米粒子加多了,部分没有进入细胞,怎么在培养的过程中除去这些没进入细胞的纳米粒子,因为如果粒子太多的话,没法用玻璃刀切。或者有没有其他方法?加少点纳米粒子?做过的大侠给点在这个实验中的技巧啊!!!谢谢!!
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钻石[使用道具]
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【回复】

用PBS离心,洗几次就好了!
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小熊妮妮[使用道具]
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【回复】

有些颗粒吸附在细胞表面貌似光洗洗不掉
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【回复】

对于TEM切片不了解,想请教一下,什么时候需要切片,对于检测样品有什么好处。
问的好像很白痴,请指教
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小熊妮妮[使用道具]
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【回复】

很多样品都比较厚,而TEM的电压即使到了200 kV,也只能穿透200 nm,所以一般的样品都要想办法弄薄。
一般的无机粉末就用研磨法,方便易行。但也有一些样品比如纳米线,通常是躺着的,但你就想看端部的样子和结构,那么只好包埋切片。这样切片就起到固定样品到某一个方向,而后对某一方向减薄的作用。还有核壳结构,如果单单从衬度上看有时候不是很确定,但如果中间剖开,一切都真相大白,分析元素组成还不互相干扰。
很多生物样品也是这样,但切片之前需要做很多处理工作,比如脱水,固定,染色等等(不一定都这么处理)。也有超薄切片,冷冻切片,都是为了看清楚一个组织的内部结构细节,而想办法减薄样品。
只是就个人了解给你一些信息,供您参考。
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yayayu[使用道具]
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【回复】

TEM 切片一般要小于70nm厚度,包埋切片一般用环氧包埋, 就知道这么多了。
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大大[使用道具]
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【回复】

TEM的切片厚度好像要在200nm以下,50nm 最好,切片的量一般都很少就够了。材料还要看是否需要冷冻切片及其使用玻璃刀还是金刚刀。
还要看你的样品软硬度怎么样,要是软的话可以用液氮冷却,另外就是将你的样品剪个三角形状放在环氧树脂中固化,然后再切。一般做TEM要求样品的厚度在100nm左右,更薄当然更好,这个老师会告诉你的。其实制样需要多做几次才能熟练,开始挺难的,特别是切那固化的样品。刀最好用带钻石的,这比玻璃刀切的样表面光滑,厚度均一。
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