小中大谢谢你上次给我解答的问题,一直还没感谢您呢!呵呵 ,不过又有新的问题要请教您了!具体如下:
1)麻烦您帮我具体说一下稀释质粒模板时的注意事项和一些细节问题,我现在就是无法避免高拷贝对低拷贝的污染问题;加样顺序如何;稀释模板的时候用不用反复吹打,混匀,瞬离;我的标准曲线就是直线性不好,而且现在还是斜率太大了,扩增效率很高,不知道什么原因。
2)我把定量PCR产物拉PCR,发现标准品居然都没有条带,反而样品有隐约的条带。我用普通PCR拉标准品条带很亮,说明引物没有问题呀,唉 ,奇怪了3)我把我的体系给您说一下啊,您看看是不是体系也有问题,我是用试剂法做绝对定量的:20ul体系---SW 8.2ul ; SYBR 10 ul ; ROX 0.4 ul ; P1 (5umol/l) 0.2 ul; p2(5umol/l) 0.2 ul ; 质粒模板 1 ul
一下写这么多,麻烦您了!