小中大
我试着解释下,不对,请赐教。
RT-PCR:reverese transcription PCR, 逆转录PCR,为什么要逆转录呢,我们要看一个基因表达不表达,表达多少,得从mRNA来分析,所以我们先提RNA,在做逆转录PCR,得到cDNA,该cDNA与基因的序列是一致,再用cDNA做实时荧光定量PCR(real time PCR)或者普通PCR来分析该基因的表达情况,结合内参基因及对照,如果该基因的mRNA多,那么cDNA也就多,那么real time PCR起峰就越快,则说明该基因表达量高。或者说该基因表达升高,则mRNA变多,cDNA也变多,real time PCR起峰就越快。
Real time PCR: 举人禽流感H5N1的real time PCR检测为例,人禽流感的基因正常情况不存在于人体基因组中,用血提出人的基因组DNA,如果感染H5N1了,可以通过Real time PCR检测到是否有禽流感的基因的存在,没有感染,则检测不到该基因,CT值至少在35个以上。real time PCR如果用DNA做模板,就是看有没有该基因,用cDNA模板,就是看该基因表达有多少。(都要有对照哦,跟对照相比)
不知道解释的对不对,希望不要死命被拍砖哦,请各位多多包涵。
“看某一个传导通路是否在基因水平上影响某蛋白的表达是不是只做RT-PCR就可以了呢”,这句话说的就有问题。