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标题:【求助】RT-PCR和Realtime-PCR

ROSE李[使用道具]
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【求助】RT-PCR和Realtime-PCR


本人刚接触实验有一事不明,RT-PCR和Realtime-PCR这两种方法分别在什么情况下选择呢?比如我想看某一个传导通路是否在基因水平上影响某蛋白的表达是不是只做RT-PCR就可以了呢。谢谢各位大侠
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65urh[使用道具]
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听您的语气您应该是位长者 我想和您说不是每个学生都像您想的那样能够扎实的掌握一些实验的基础知识
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tewank[使用道具]
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你的基本概念不清楚,没法回答你。
先回去好好看看书,搞清楚什么是“RT-PCR”,什么是“Real time-PCR”。
哪个学校的学生?老师有责任啊。
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伊莎贝拉[使用道具]
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我试着解释下,不对,请赐教。
RT-PCR:reverese transcription PCR, 逆转录PCR,为什么要逆转录呢,我们要看一个基因表达不表达,表达多少,得从mRNA来分析,所以我们先提RNA,在做逆转录PCR,得到cDNA,该cDNA与基因的序列是一致,再用cDNA做实时荧光定量PCR(real time PCR)或者普通PCR来分析该基因的表达情况,结合内参基因及对照,如果该基因的mRNA多,那么cDNA也就多,那么real time PCR起峰就越快,则说明该基因表达量高。或者说该基因表达升高,则mRNA变多,cDNA也变多,real time PCR起峰就越快。
Real time PCR: 举人禽流感H5N1的real time PCR检测为例,人禽流感的基因正常情况不存在于人体基因组中,用血提出人的基因组DNA,如果感染H5N1了,可以通过Real time PCR检测到是否有禽流感的基因的存在,没有感染,则检测不到该基因,CT值至少在35个以上。real time PCR如果用DNA做模板,就是看有没有该基因,用cDNA模板,就是看该基因表达有多少。(都要有对照哦,跟对照相比)
不知道解释的对不对,希望不要死命被拍砖哦,请各位多多包涵。
“看某一个传导通路是否在基因水平上影响某蛋白的表达是不是只做RT-PCR就可以了呢”,这句话说的就有问题。
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seagate[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 tewank 于 2016-2-9 21:21 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
你的基本概念不清楚,没法回答你。
先回去好好看看书,搞清楚什么是“RT-PCR”,什么是“Real time-PCR”。
哪个学校的学生?老师有责任啊。

很讨厌这种语气说话的人, 什么叫基本概念?谁规定的是基本概念?对有些人是基本概念对另外一些人不见得是基本概念。 谁说大学里就一定要教?我打赌有些大学里就没有教。请问丁香园有规定哪些问题不可以问吗? 再说任何问题都是可以讨论的,即使是基本概念也是可以讨论的,哪怕是“什么叫细胞? 什么叫DNA?”都是可以讨论的,因为你不问就永远不知道别人怎么说,就永远不知道别人的看法。在你回答别人问题的时候,也同时在巩固和提高你自己,因为有些问题你可能平时没有仔细想过,别人问了刚好也帮你总结。搞科研本来就有先有后,犯不着因为自己多干了几年就一副教育部长的口气,还问哪个学校的,难道还要向其学校通报不成?把一个轻松开放的论坛搞得充满白色恐怖气氛!
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tewank[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 seagate 于 2016-2-9 21:22 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

很讨厌这种语气说话的人, 什么叫基本概念?谁规定的是基本概念?对有些人是基本概念对另外一些人不见得是基本概念。 谁说大学里就一定要教?我打赌有些大学里就没有教。请问丁香园有规定哪些问题不可以问吗? 再说任何问题都 ...

我的本意是共勉,没有教训任何人的意思。因为我本身基础知识也不扎实,为此而遭受了一次至今在心里还留有创伤的一次经历。我研究生时候的老师对我说,基本理论知识不扎实,就不会有可持续发展;这就像泉水和池塘里的水一样,只有井水才不怕干旱;只有扎实的理论知识,结合阅读前沿文献,才会碰撞出思想的火花。
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tewank[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 ROSE李 于 2016-2-9 21:20 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

本人刚接触实验有一事不明,RT-PCR和Realtime-PCR这两种方法分别在什么情况下选择呢?比如我想看某一个传导通路是否在基因水平上影响某蛋白的表达是不是只做RT-PCR就可以了呢。谢谢各位大侠 ...

百度一下不就出来了吗?⊙﹏⊙b汗
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tewank[使用道具]
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我没有讽刺你的意思。
你研究的内容是”看某一个传导通路是否在基因水平上影响某蛋白的表达“,由此可以判断你应该是本科三四年级的学生,或者硕士研究生的起步阶段。
无论处于上面哪两种情况,无论是生物相关学科的本科生,还是临床相关学科的本科生,至少在三年级以前,在基础课教材里面就应该掌握了这些基本知识
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ROSE李[使用道具]
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听您的语气您应该是位长者 我想和您说不是每个学生都像您想的那样能够扎实的掌握一些实验的基础知识 即使是研究生读完也会有一大批学生没做过实验 也许像您所在的那种好学校才会让学生在三年级以前就掌握RT-PCR的事儿
那么谁又能保证过个两三年还能记忆犹新呢
如果您没有生气那是最好的了 如果因为我的某些话影响了您对我们这些孩子们的看法 您就太片面了 也许我是只菜鸟 也许我的态度不好 但并不代表全部 也不代表您的学生吧
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eric930[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 tewank 于 2016-2-9 21:22 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我的本意是共勉,没有教训任何人的意思。因为我本身基础知识也不扎实,为此而遭受了一次至今在心里还留有创伤的一次经历。我研究生时候的老师对我说,基本理论知识不扎实,就不会有可持续发展;这就像泉水和池塘里的水一样,只 ...

很赞同,基本理论知识确实应该打牢,不然总是浮在表面,很难做深入的研究!
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