【求助】关于组织总RNA提取

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标题:【求助】关于组织总RNA提取

jujuba[使用道具]
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发表于 2016-2-9 22:23 资料个人空间短消息加为好友

小中大

本人以肾脏和胎盘为标本，用Trizol 提取总RNA做RT-pcr
其最终结果虽可做出较明显的看家基因阳性对照
可提出的总RNA（用紫处分光光度仪测试纯度尚可）电泳结果总不理想
（我只是用普通的TAE琼脂糖电泳）
我想是否是在组织处理或组织贮存上存在问题：
{贮存}我将手术标本用生理盐水洗净，小封口袋分装存于-70度冰箱
{处理}我前后分别试过在Trizol中用眼科剪剪，用电动匀浆器匀或者
是先在液氮罐中过夜然后用研钵研。。。
结果匀无明显改善。。
是不是组织贮存过久？我用的组织贮存了三个月左右。
还望各位高手指点，不胜感激~~Wink

yayya[使用道具]
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发表于 2016-2-9 22:24 资料个人空间短消息加为好友

小中大

差不多，样品放一个月RNA即可降解

jujuba[使用道具]
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发表于 2016-2-9 22:24 资料个人空间短消息加为好友

小中大

这么说来组织在低温冰箱里存放的时间不能太长。
可是万一必须贮存这么长的时间？
应该经过什么特殊处理吗？

大尾巴[使用道具]
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发表于 2016-2-9 22:24 资料个人空间短消息加为好友

小中大

一般来说在深低温冰箱放3个月不会使RNA明显降解，极限时间可以长达2年，这还要看是什么组织，像胰腺就要短一些。
重要的是取材时候的处理和时间，还有抽的时候。你既然有液氮，应该直接放在液氮了，液氮理论上可以无限长。
那也有可能是TAE电泳的问题，为什么不用变性电泳，这是常规。
最好用冻存管。
有一种冻存液，常温下可以数日，但是没有必要，除非特殊情况。

45778[使用道具]
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发表于 2016-2-9 22:25 资料个人空间短消息加为好友

小中大

As the guy above mentioned, Just try the qiagen's product . About the storage of sample,your handling should be fine. Personally, I prefer to Qiagen's RNAeasy kit to trizol, the former seems to have better results.

jujuba[使用道具]
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发表于 2016-2-9 22:25 资料个人空间短消息加为好友

小中大

非常感谢。。。。
前几日。我改用培养细胞提取总RNA（一样是Trizol ,一样是TAE电泳）
结果不错。。。
我想也许组织提RNA效果不佳关键在于组织的处理上的。。
是不是在处理上有什么问题？
每次从手术室取回组织到最后放入冰箱大概也要2个小时左右的时间。。。
不是是不是这个时间太长。。。
不知各位高手是怎么处理的

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发表于 2016-2-9 22:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

样本取出后最好尽快投入液氮中速冻，然后转移到-80度低温冰箱中长期保存，这样可以很好的防止RNA的降解。我有样本如是处理，时隔4个月取出提取RNA，效果还很好。

shanzhapia696[使用道具]
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发表于 2016-2-9 22:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你从去标本到放到冰箱地2个小时中，是放在那里的？如果在液氮里（必需这样）就没事，否则肯定不行。

小野花[使用道具]
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发表于 2016-2-9 22:27 资料个人空间短消息加为好友

小中大