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液N2研磨时不要使液N2挥发净，随时补充，加入裂解液并且彻底而迅速地匀浆。
RNA的提取
杂质的抽提
采用有机（酚\氯仿）抽提时应充分混匀。
离心分离两相时，应保持一定的转速和时间，使蛋白质和DNA分布到中间层和有机相中，RNA留在水相中。
对脂肪含量较多的样品注意不要吸入油脂层，可以再次用有机溶剂抽提。
RNA的沉淀和溶解
含有RNA的水相过吸附柱，通过去蛋白液和漂洗液去除蛋白和多糖等杂质。
或使用异丙醇沉淀RNA应充分地混匀并放置10min左右离心收集沉淀。70%酒精洗涤，晾干。用经过DEPC处理过的水或专门的试剂来洗脱或溶解RNA。
样品收集后或需长期保存时应置于-70摄氏度或加入RNase抑制剂，分装使用。
RNA的检测
电泳槽系统的处理，乙二醛化琼脂糖凝胶电泳，含有甲醛的琼脂糖凝胶电泳
RNA纯度及浓度的检测
A260=1 约40微克/mlRNA
A260/280约为1.9-2.1
RNA提取常见问题
1、抽提过程不彻底，存在蛋白质或者多糖多酚的污染
2、DNA污染
3、离子浓度较高
原因对策
1、保证彻底地裂解和一定转数一定时间的离心，增加有机溶剂抽提的次数，用吸附柱纯化。
2、减少处理样品的量，加入不含RNase的DNase处理，再次纯化。
3、增加漂洗次数。
RNA提取常见问题
问题一、RNA样品不纯
1、样品含有杂质杂液。
2、样品过量或者样品裂解，和匀浆不彻底。
3、RNA未有效地吸附沉淀和洗脱。
4、样品RNA含量少。
原因对策
1、去除样品中的杂质，离心除尽样品中的培养基或储存液。
2、减少样品用量，充分研磨样品，增加裂解液的用量和裂解的时间。
3、延长吸附时间或者保证异丙醇沉淀的时间和离心时间，再次洗脱。
4、重复吸附，加入肝糖等有助于RNA沉淀的试剂。
问题二、RNA得率低
1、样品不新鲜或样品保存不当，RNA降解。
2、污染了RNase。
3、样品储存不当。
原因对策
1、尽量取新鲜样品，取样后立即放入液N2保存，或者放入专门的储存液内。研磨样品要及时补充液N2。
2、认真地处理相应的器具和试剂，严格按要求操作。
3、-70摄氏度冻存，分装使用，加入RNase抑制剂。
