【求助】请大家帮忙看看扩增曲线（附图）

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标题:【求助】请大家帮忙看看扩增曲线（附图）

乌贼老弟[使用道具]
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发表于 2016-2-10 14:57 资料个人空间短消息加为好友

小中大

很不好意思在这里问些白痴问题，只因为我的毕业实验要用real-time PCR 来检测，但由于种种原因我是送出去给公司做的，
我想请问大家：real-time PCR 的
1、最后结果要不要跑胶？
2、做的扩增曲线没有明显的指数增长期、线性增长期、平台期，而且不够平滑，帮忙看看扩增曲线能否通过评审?
公司作如下解释，不知是否合理？
“扩增的是40循环，而不是永无止境扩增下去，所以看不到平台期。做的实时量PCR（FQ-PCR）是终前检测，不是终后检测，所以也不需都要达到平台期。如果从审美观点上可能不是很好看，但这不会影响结果。使用是染料法做，曲线最后面肯定有个折线，因为这是机器正在采溶解曲线，这也是做染料必须有的曲线。"
谢谢大家！

baidukk[使用道具]
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发表于 2016-2-10 14:57 资料个人空间短消息加为好友

小中大

i think de guy in de company s right nd de outcome is totally fine, to me .
as to gel eletrophoresis, sure, u cn do it if u `d like but not necessary ,in that there s nothing indicating u got non-specific amplication in ur products . plus, de graphs already showed amplication happend.
all above is jst my thought, u may need much more opinions frm others.

eric930[使用道具]
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发表于 2016-2-10 14:57 资料个人空间短消息加为好友

小中大

最后不需要跑胶。
我觉得溶解曲线还行，但不明白后面的折线，我也是新手，但我自己做的，没遇到过这种情况。只是看不出内参和目标之间明显的扩增差别。

小野花[使用道具]
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发表于 2016-2-10 14:58 资料个人空间短消息加为好友

小中大

realtime PCR的结果是不需要电泳图的，但你的扩增曲线是没法用的。
realtime PCR的核心数据就是扩增曲线，它不仅反映了CT值，更重要的是反映了整个PCR的扩增质量，而ct值必须依据一个良好的扩增质量才能作为ct值来确定，所以，如果你的扩增曲线不好的话，即使得到了ct值，这个值也是不可靠的，在科学研究上，不可靠的数据是不能作为实验结果来达到你的实验目的。

小野花[使用道具]
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发表于 2016-2-10 14:59 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 baidukk 于 2016-2-10 14:57 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

i think de guy in de company s right nd de outcome is totally fine, to me .
as to gel eletrophoresis, sure, u cn do it if u `d like but not necessary ,in that there s nothing indicating u got non-spe ...

Chinglish 。这可不是好现象。amplication 还弄个错误的单词忽悠大家
说英语没有错，要选择适当的环境

yayya[使用道具]
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发表于 2016-2-10 15:00 资料个人空间短消息加为好友

小中大

1.因为染料法最后做融解曲线，所以理论上不用跑胶，从融解曲线上就可以分辨特异性了（从你的融解曲线上看，只有3～4条存在非特异性扩增）；
2.似乎只有HGF的平台期不明显，其他都还可以。不明显的原因一是跟起峰晚有关（28左右才起峰），二是扩增效率明显不如其他（可能是体系的原因）。至于曲线最后一个循环的折线，我个人认为厂家的说法说不通，既然说做融解曲线都这样，为何标准外参照的扩增动力学曲线没有这一折线。我做定量PCR时也做融解曲线，但分析软件会把融解曲线和扩增曲线分开，没有出现过这种状况。

乌贼老弟[使用道具]
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发表于 2016-2-10 15:00 资料个人空间短消息加为好友

小中大

多谢各位友情演出
请问哪里有关于染料法比较系统的资料，希望大家介绍一下，谢谢