小中大
各位大侠:
1:我最近正在做RT-PCR,可是一直没有结果,有人建议用降落PCR.,请教降落PCR必须与热启动联合才能做吗?如果必须用热启动那普通的Taq酶可以吗?有人说可以在预变性后再加酶,这样做可以吗?
2另外,做RT是我用的是AMV请问RNA的量要加多少?说明书上说是1微克这里指的是总RNA 还是mRNA,我提组织后测RNA浓度为3.5微克/微升,做RT时要加多少RNA?RNA需要稀释吗?稀释成1微克/微升?然后取1微升?
急盼回复!先谢了!
1,降落PCR不必要非和热启动联合在一起.用普通TAQ酶当然可以热启动,和耐热酶没什么区别.
2,我想应该是总RNA,一般情况下没有特别要求,RNA分析只需要提取总RNA,按你的浓度我认为加1-2ul,不需要稀释成1ug/ul