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标题:【求助】做土壤中,活细菌的数量

大花猫bb[使用道具]
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【求助】做土壤中,活细菌的数量

但是我不太明白,你为什么要做土壤中,活细菌的数量?你的实验想得到什么方面的结果呢?你要干什么事情呢?按照你所说,你得到的活菌的情况要干什么呢?
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n111[使用道具]
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【回复】

目前可培养的微生物只是很少的一部分,还有你的方法做的也是只一部分,不可能把所有菌株做全的,这样的话,你所追求的活菌,就没有什么意义了。
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p1900[使用道具]
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【回复】

有相应的方法。
第一,利用相应培养基进行培养,但是能培养的细菌其实在很少,如果进行培养,将有大部分菌株丢失。
第二,利用活细菌检测试纸,这个你管公司问就可以,在微生物实验里很普遍的。
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jishiben[使用道具]
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【回复】

但是最关键的是,你要搞清楚自己要干什么?要哪些结果?为什么要这些结果?根据哪些结果可以得到哪些结论?有些实验考虑会是多余的。
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n111[使用道具]
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【回复】

我的意思是,参与土壤活性的微生物,比如细菌,在特定样品和特定时间,它的活性细菌总数(活着的)是一定的。我们常规提取总DNA,然后用通用引物定量PCR,得出的值并不准确。因为提取的总DNA中肯定有一部分是已经死亡的细胞释放出来的未被降解的DNA,这样在一定程度上夸大了荧光定量PCR值。您觉得呢?
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mimima[使用道具]
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【回复】

我只是想找出一种方法,将土壤样品中的死亡细胞中的DNA去除,再用常规的DNA提取和定量PCR来确定样品中的细菌总数。这样得出的值,可以算是活细胞数量。
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【回复】

你的荧光定量是相对定量,还是绝对定量啊?不管是相对定量还是绝对定量,都是拿来比较,说是定量,但也是在一定条件下的相对比较。根据CT值或相对的CT值来进行比较,找规律。实验中有死菌还是没有死菌,都是反应了菌的相对量。但也不能你跟菌这个相对量说,某个菌多多少,只能说相对多多少。并不能根据已有的CT值或相对的CT值计算或得到相应菌量。
    如果你有要定的菌的信息,我建议,你跟菌该菌的信息去做,可能会好些。要是只是根据总DNA做的总体的PCR,我觉得那就没必要取出什么死菌了。这里的误差都会大雨你所谓去除的死菌的数量。
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qinqinai[使用道具]
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【回复】

恩。感谢您的辛苦回复。我刚才查阅了文献,确实有不少介绍用不同方法去除样品中死亡细胞DNA的方法,然后采用定量PCR(绝对)测定特定菌种的数量。我觉得,在某些特定环境体系,细胞更新换代很快,样品中有不可低估的死亡细胞DNA存在,对我们分析数据造成了一定的误差干扰。
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wwwh[使用道具]
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【回复】

您好,对去除样品中死亡细胞DNA的方法我也很感兴趣,我想测食品发酵过程中微生物的动态变化
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