细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】关于大肠杆菌诱导表达蛋白问题

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 18  1/2 12››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】关于大肠杆菌诱导表达蛋白问题

jude[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 72164
精华 1
积分 599
帖子 754
信誉分 102
可用分 4721
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-5
状态 离线
1

发表于 2016-2-17 10:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】关于大肠杆菌诱导表达蛋白问题

跑的SDS胶上面有条带，下面看不清，但是marker可以看清。不知道是什么原因，是蛋白不纯？没诱导出来？蛋白降解？蛋白加样量的问题？还是胶的问题？图片的marker旁边的是之前30度空载体对照，后面的是37度诱导的，但是下面不清，我的蛋白是26。已经做好几遍了，感觉心好累，不知道怎么做了。问别人说做个WB，但是如果是我的蛋白降解了，做这个有什么意义呢？我是调剂到生物技术的，没什么基础，总是失败。。。。希望大家能帮我分析下，万分感激，谢谢了


查看积分策略说明
附件
2016-2-17 10:55
w75h3720846_1449667634_465.jpg (23.82 KB)
 
顶部
SO2[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 118006
精华 0
积分 355
帖子 369
信誉分 100
可用分 2696
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-12-9
状态 离线
2

发表于 2016-2-17 10:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你的点样太多了哦  看不出啦    另外脱色也不完全  你的蛋白质有什么特殊性质吗   也可能影响跑胶效果的。
顶部
bojitu[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 118124
精华 0
积分 294
帖子 308
信誉分 100
可用分 2321
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-12-10
状态 离线
3

发表于 2016-2-17 10:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
上样量调成5ul到10ul，就能分开了。
顶部
3.14[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 117870
精华 0
积分 275
帖子 290
信誉分 100
可用分 2171
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-12-7
状态 离线
4

发表于 2016-2-17 10:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
多大浓度的胶。
顶部
ending[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76092
精华 0
积分 771
帖子 1242
信誉分 100
可用分 6981
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-1
状态 离线
5

发表于 2016-2-17 10:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

降低上样量试试。
顶部
jude[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 72164
精华 1
积分 599
帖子 754
信誉分 102
可用分 4721
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-5
状态 离线
6

发表于 2016-2-17 10:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 3.14 于 2016-2-17 10:56 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
多大浓度的胶。

分离胶是12%的，但是marker跑开了呀，和胶有关吗
顶部
jude[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 72164
精华 1
积分 599
帖子 754
信誉分 102
可用分 4721
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-5
状态 离线
7

发表于 2016-2-17 10:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 ending 于 2016-2-17 10:57 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

降低上样量试试。

是浓度太大了吗？我试试看。应该不是蛋白降解的问题吧？
顶部
taoshengyijiu[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77450
精华 0
积分 467
帖子 614
信誉分 100
可用分 3876
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
8

发表于 2016-2-17 10:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 jude 于 2016-2-17 10:57 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

分离胶是12%的，但是marker跑开了呀，和胶有关吗

胶上面可见的最小marker条带是多大？
顶部
taoshengyijiu[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77450
精华 0
积分 467
帖子 614
信誉分 100
可用分 3876
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
9

发表于 2016-2-17 10:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 jude 于 2016-2-17 10:57 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

分离胶是12%的，但是marker跑开了呀，和胶有关吗

觉得那些小一些的蛋白都在一起，没有分开
顶部
jude[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 72164
精华 1
积分 599
帖子 754
信誉分 102
可用分 4721
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-5
状态 离线
10

发表于 2016-2-17 10:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 taoshengyijiu 于 2016-2-17 10:58 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

胶上面可见的最小marker条带是多大？

是25.我的蛋白是26。
顶部
 18  1/2 12››