液相色谱

如题，小弟最近用分析HPLC来制备，10mg样品溶解到0.4ml的流动相（55%甲醇：45%水）里，每次进针15uL，主峰在15min左右出峰，但2~5min会出现很高的杂峰（和主峰差不多高），我把这些杂峰收集（未浓缩），进样发现有主峰！难道是样品直接被冲下来了？如何避免？（如果是进样量太大，那为何第二张图2~5min还是有不规则的杂峰？）

样品进样


杂峰收集进样


[ 本帖最后由 miracle 于 2011-10-18 17:43 编辑 ]

这说明2-4min左右确有杂质！
其实相对来看，浓样品在2min的“杂峰”的出峰情况以及相对比例明显比稀样品要多，这是因为进样太大造成柱过载，过载的样品无法在柱上保留，直接被冲了下来。就制备来说，都是过载进样的，关键要搜集纯的主峰，前面的过载遗留峰可以视情况再行回收！

你收集的主产品有没有单独走过啊，看看呢！

恩，我以前也这样做过制备，总会有类似的问题发生，看看有没高人解答下

仔细看了你的图后，我认为你分析的有偏差！
1 前5分钟的可以视为溶剂峰，
2 你制备可能没有问题，但是你说的制备的前5分钟内有主峰是错误的，因为第一张图主峰响应值为1600mv，而第二张图是8mv，考虑很有可能是你没有洗针洗干净。
3 你好好对比下，第二张图和第一张图实际上是一模一样的，包括前五分钟也都是。
4所以，很有可能就是溶剂峰就那样，至于是不是这样，进一针溶媒即可！

但，绝对不可能前面出现的东西，制备后却在后面出现，不可能的！

主产品走过，是纯的


感谢你的解答：
1.关于溶剂峰：我进过纯水、纯甲醇、流动相，2~5min会有不大于1mUA的波动，绝对不会出现第一张图里面快1000的杂峰。
2.第二张图是我收集了第一张图2~5min的杂峰（10ml），是从10ml里面取15uL进样的，相当于稀释了很多倍，所以第二张图的主峰只有10mUA左右，而且我进样之前都用甲醇冲洗过进样口，也洗针了。
3.我将2~5min的杂峰收集之后浓缩，是红色的，和样品颜色一致，称重8.8mg，而原来样品是10mg，相当于8.8mg被冲下来了，只有1.2mg保留在柱子是
我也很难理解为什么会被冲下来而后面还正常出峰。。。但事实就是这样。。。求解答，快疯了

感觉进样量大了~过载，造成有部分没有保留住，另外觉得用制备液相做就不会，制备柱粗，上样量大

那用制备液相或者半制备液相能分开吗？我现在在分析柱上能把两个峰分到峰尾相接

只要你制备柱和分析柱填料是一个型号的就可以，分离能力类似也行~流速和进样量都是分析条件直接线性放大计算的。制备柱的效率一针赶上你这15微升进一天的制备量了~，况且你还可以切峰~

可以的，分析上这么大的浓度你都已经实现基线分离了，制备上当然也可以，只要填料类型一样就行。

但是制备柱效低很多啊，填料一样不代表柱效一样啊