PCR仪 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】利用Real time PCR检测miRNA

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】利用Real time PCR检测miRNA

langlang[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77033
精华 0
积分 668
帖子 976
信誉分 100
可用分 5741
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-12
状态 离线
1

发表于 2016-2-29 14:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】利用Real time PCR检测miRNA

目前正在准备做肿瘤mature miRNA分离，利用real time PCR检测工作。
mature RNA片断很小（～22nt），RT primer文献上介绍使用stem－loop primer，请问一下哪位战友看到过具体的stem－loop primer结构呢？
Ambion公司给的资料又是语焉不详，真是郁闷啊。
顶部
ending[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76092
精华 0
积分 771
帖子 1242
信誉分 100
可用分 6981
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-1
状态 离线
2

发表于 2016-2-29 14:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

买他们公司的引物试剂盒吧，但是我又没有查到用这个试剂盒发表的文献，唉，确实不好办！
顶部
tie8[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75844
精华 0
积分 442
帖子 543
信誉分 100
可用分 3571
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-28
状态 离线
3

发表于 2016-2-29 14:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

本来想直接给你答案的,不过搜一下可以获得更多收获.
上pubmed搜吧,有几篇全文里有茎环的序列
顶部
wood533[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76132
精华 0
积分 863
帖子 1385
信誉分 100
可用分 7745
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-1
状态 离线
4

发表于 2016-2-29 14:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

文章发表在nucleic acid research上，有两种方法，Ambion的是SYBR green法，ABI是Taqman-MGB法，对应的文章有两三篇，很容易找到，并且NAR的文章是全免费浏览的。在文章的补充材料中有详细的序列介绍，尤其是Taqman法，提供了近200种miRNA的检测用序列。具体文章来源可看下贴：
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=5918266&sty=1&tpg=1&age=0')
顶部
langlang[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77033
精华 0
积分 668
帖子 976
信誉分 100
可用分 5741
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-12
状态 离线
5

发表于 2016-2-29 14:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢大家
看了很多的关于Taqman的引物设计方案
但是由于各种原因，我们最终选择了使用sybrgreen
实验正在进行中
顶部
memory[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76531
精华 0
积分 378
帖子 436
信誉分 100
可用分 2962
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-7
状态 离线
6

发表于 2016-2-29 14:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

结果不理想，溶解曲线特异性不好
顶部