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标题:【求助】PCR反应总是污染什么原因？

xevin[使用道具]
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发表于 2016-2-29 17:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】PCR反应总是污染什么原因？

做普通的pCR反应总是污染，做的时候很小心了。出现污染好几次了，每次污染解决后隔的不久又会污染，污染的东西从水，酶，引物都有过。请问这可能是什么原因造成的？我总是更换试剂也不是办法。希望各位大大支支招吧！不胜感激。
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发表于 2016-2-29 17:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

也许是加样的时候不小心吧.
配Mixture，分装到各个管子，模板最后加。细心一点应该不会总是污染的哈。
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xevin[使用道具]
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发表于 2016-2-29 17:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不是这样的，已经很小心了。每次都是分装的啊！会有别的原因吗？
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发表于 2016-2-29 17:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

加样时每次都更换一个枪头了吗
我觉得是枪头没换的原因，
每次换枪头
但是有些时候感觉不需要，
也麻烦
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发表于 2016-2-29 17:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

加样的时候当然要换枪头，根结也是如此的，枪头不换的话，那么各种试剂混合在一起，尤其是模版之间的污染很快就会污染，作PCR这是最基本的，如果怕麻烦可以购买专门插枪头的试剂盒，或是直接的从你刚开始购买试剂的公司要一个免费的，有专门插小枪头的盒子，你可以插完后直接丢弃就可以了。但是记住作PCR不要怕麻烦一定要注意不要污染，因为PCR是很敏感的。
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发表于 2016-2-29 17:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
因为PCR产物的量很大，可能很小的量就可以污染你下次的PCR，而且这种污染一般都是接触污染的可能性比较大，所以你的解决办法只能是把你原来的试剂全部不要，引物最好是重新配制储存液，每次稀释引物时最好是新打开的注射用水。还有要考虑你的枪是否有污染，可以清洗一下
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xevin[使用道具]
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发表于 2016-2-29 17:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢各位，具体情况是我每次发现污染了，就全部试剂都换掉，可是再做几次之后又会污染.有时是引物，有时是酶，后来我就不去管是什么被污染了。而枪头当然是用了就换，加了样就丢掉。不重复利用的。
另外请问一下，假如是枪污染了，怎么清洗？
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any333[使用道具]
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发表于 2016-2-29 17:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

枪可以拆卸下来，把你的前部用洗涤灵洗后用大量水冲洗，然后用DEPC水配制的酒精擦拭干净。
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minran_1980[使用道具]
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发表于 2016-2-29 17:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
第一：换带虑芯的吸头，会稍微好一点；
第二：提取，配液，加样，电泳，四个过程，分开四套加样器，尤其电泳，需要专门的加样器、吸头盒和实验台，实验室条件做不到的情况下，至少也得把电泳跟前面三个步骤分开来。
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xevin[使用道具]
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发表于 2016-2-29 17:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢各位，先试试看洗洗枪吧！
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