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标题:【求助】PCR条带弥散的问题

白白的[使用道具]
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发表于 2016-3-1 15:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】PCR条带弥散的问题


近来实验中，出现了很多次PCR条带弥散现象，不知各位战友以前有没有遇到过，用什么方法进行克服的，谢谢啊。
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白白的[使用道具]
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发表于 2016-3-1 15:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

先看看你模板的浓度是不是太高了，讲解的怎么样
如果没有特殊的就是你就没扩充来东西而已啦
哈哈
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ququer787[使用道具]
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发表于 2016-3-1 15:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我之前也遇到这样的情况，一开始实验做的很好，但是后来就弥散了，而且是之前好的重新做也是弥散的，真的是搞不懂什么原因，什么方法都用了，比如说换新的试剂，换反应体系等，但是结果还是弥散，有没有什么好办法解决这个问题，大家快来帮帮忙！
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发表于 2016-3-1 15:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

优化Tm,降模板，降Mg
如果都优化过了，怀疑dNTP有问题
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memory[使用道具]
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发表于 2016-3-1 15:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

模版有没有降解
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ququer787[使用道具]
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发表于 2016-3-1 15:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

应该不是试剂的原因，除了引物不一样，其他的引物还是能够扩增出来，而且也很好！
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发表于 2016-3-1 15:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我做RACE也是出现这个情况，实在得不到单一的条带,真心求教啊
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发表于 2016-3-1 15:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 memory 于 2016-3-1 15:46 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

模版有没有降解

我是组织抽的RNA发现降解的很少才反转的，结果就老师弥散，用特异性引物好有单一条带呢
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ns5fan[使用道具]
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发表于 2016-3-1 15:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 ququer787 于 2016-3-1 15:04 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我之前也遇到这样的情况，一开始实验做的很好，但是后来就弥散了，而且是之前好的重新做也是弥散的，真的是搞不懂什么原因，什么方法都用了，比如说换新的试剂，换反应体系等，但是结果还是弥散，有没有什么好办法解决这个问题，大家快来 ...

我也遇到过，真心搞不懂啊
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