【求助】real-time PCR中内参与目的基因扩增曲线... - 经验共享

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标题:【求助】real-time PCR中内参与目的基因扩增曲线...

mnstyle[使用道具]
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发表于 2016-3-3 11:12 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你要明确一点：内参只是提供加样误差信息，只要不是过前或者过后就可以。但一定要把目的基因的结果尽量在15－25cycle起跳最好

yychen[使用道具]
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发表于 2016-3-3 11:13 资料个人空间短消息加为好友

小中大

CDNA的稀释应该用水

shenkunjie[使用道具]
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发表于 2016-3-3 11:13 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你的样品CT比较晚，要不浓度太低，要不就是有抑制物。做任何定量，标准品和样品应该在相近的范围内，PCR也不例外。

ztonyc[使用道具]
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发表于 2016-3-3 11:13 资料个人空间短消息加为好友

小中大

调动基线会影响最后结果吗？

bongte[使用道具]
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发表于 2016-3-3 11:19 资料个人空间短消息加为好友

小中大

就你所说的上述情况，我认为不应该稀释模版。
目的基因和内参的Ct值相差远没有关系，你可以通过手动调整各自的基线和阈值，把扩增曲线调整到最佳状态，详细地说明你可以参照ABI7500的说明书的40~44页。

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想请教您个问题，楼主的扩增曲线图中，样本基线不同（０.２－０.４）之间，这是什么意思呢，因为我做的基线很不一致，菜鸟级学生，希望您不吝赐教

chenshuanhe[使用道具]
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发表于 2016-3-3 11:19 资料个人空间短消息加为好友

小中大

在平时的实验中，起峰太早我觉得定量不准确。

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