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标题:求助引物设计的战友先进来这里~~~~~~·

嘉年华[使用道具]
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发表于 2011-10-19 11:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我想在目的基因两端加个Sac1和Sma1的酶切位点,但后来发现基因内部有Sac1的酶切位点,请问这怎么处理?如果换个酶切位点,可隆会变的很复杂.
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sunshine039[使用道具]
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发表于 2011-10-19 11:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
想从cDNA中分离基因，用PCR的方法，可引物如何设计呢？只有同类型物种的序列。
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INK[使用道具]
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发表于 2011-10-19 11:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
使用Primer5设计引物，是使用自动搜索的Pairs 还是编码链和反义链分别设计，然后给它们配一对？

也有过这样的疑问。后来，自己做的时候觉得分开设计得出的排列组合比较多，可选择的多，看似更合理一些。讨教了高年级师兄和实验室请来的外籍老师后总结了几点：TM值最好在60左右，两条链越接近越好；产物长度要300以上比较好；当然还要注意引物设计原则中的3段不要有A，不可有连续的CCC或GGG，再结合primer premier综合比较一下就能找到满意的引物了。我的已经做出带来了。同寝室的同学也是照这样也做出来了。
我的primer premier是同学传的
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发表于 2011-10-19 11:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
求助人MIF, MMP-3的引物,谢谢!
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tieshazhang[使用道具]
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发表于 2011-10-19 11:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
各位大侠，研究生毕业多年了，现又要做RT－PCR了，很多知识都忘了，请各位朋友不吝赐教，现在这里谢谢了！我的课题是检测大鼠骨骼肌葡萄糖转移载体（GLUT4）mRNA表达半定量。我现在还不知道引物的如何设计，必须自己设计吗？我在资料上找到的引物序列可用吗？在哪家公司合成引物质量和价格更好呢？再谢了！
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飞天小鹿[使用道具]
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发表于 2011-10-19 12:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
计算GC含量要将酶切位点和保护性碱基计算进去吗？因为primer5得到的GC含量是加酶切位点之前的，是不是可以通过改变酶来调节GC含量呢？我刚刚开始学习设计引物，希望前辈们多多指教。不胜感激--  
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join[使用道具]
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发表于 2011-10-19 12:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
各位牛哥哥靓姐姐,
偶门外汉子一个,完全不知道引物怎么设计,郁闷啊 ,老板在屁股头催着赶着实验进度,烦人啊,求高人指路. 本人要做的指标是 L型钙离子通道蛋白的表达.
要查什么东东 再怎么设计呢? 谢了啊 我先
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森林木[使用道具]
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发表于 2011-10-19 12:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
本人想通过荧光定量PCR技术检测动物血清中普通大肠杆菌DNA的含量，从而判断血清中大肠杆菌移位的情况，想请教各位大侠是否可以设计一种只要是大肠杆菌就可以测定的通用引物序列，是否可以有现成的这种试剂盒。请多多指教，不胜感激！！！求助普通大肠杆菌的PCR检测技术
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#甜#[使用道具]
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发表于 2011-10-19 12:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
各位老师请指教：我做的是昆明小鼠的bfgf就是碱性成纤维细胞生长因子的RT-PCR，比较郁闷的是从NCBI 和 EBI查不到基因序列，只有人和大鼠、猫等动物的，没有查到小鼠的。所以不知道如何设计引物，敬请各位老师及高手指点。谢谢。

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请教您，如何在NCBI 和 EBI上查基因序列啊？
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mogu[使用道具]
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发表于 2011-10-19 12:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
求助siRNA的MMP-9的引物设计（人滋养细胞的）,谢谢!
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