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标题:【求助】甲基化特异性PCR的修饰问题

椰子叶子[使用道具]
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发表于 2016-3-3 16:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问：
国产的亚硫酸氢钠和对苯二酚（北京化学试剂公司）和Sigma的sodium bisulfide及hydroquinone 的价格个是多少？谢谢
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了了[使用道具]
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发表于 2016-3-3 16:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

大家知道北京医科大学肿瘤研究所的邓大君教授么？他可是专家啊！我也想做MSP，可是畏难啊！失败……
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45778[使用道具]
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发表于 2016-3-3 16:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问邓教授是在北大医院还是在定慧寺的肿瘤医院?
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xue258[使用道具]
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发表于 2016-3-3 16:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

邓教授在北大附属一院，北京市肿瘤研究所。
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glass[使用道具]
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发表于 2016-3-3 16:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我想请教各位大侠：如何设计MSP的引物？有专门的软件吗？
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glass[使用道具]
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发表于 2016-3-3 16:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
野生型引物能扩出条带来，是因为甲基化修饰不完全，修饰后的DNA中有野生型的DNA 。在进行MSP时往往要采用热启动PCR,使双链DNA充分解链，仅其中的一条链作为模板进行扩增。
我想问一下何谓野生型引物？它和M或U引物有和不同？何谓甲基化修饰不完全，是不是一部分DNA修饰了另一部分完全不修饰，但这样的话M或U引物均扩得出啊；还是所有DNA中仅部分位点进行修饰，所以M或U引物扩不出，但野生型引物扩哪段？
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发表于 2016-3-3 16:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
野生型引物是针对未修饰的DNA设计的，而甲基化特异和非甲基化特异性引物都是针对修饰后的DNA设计的，所以如果修饰完全的话野生型引物是不会扩增出条带来的。
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TNT[使用道具]
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发表于 2016-3-3 16:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我知道这个网站，上面的protocol是手工修饰，我用的是试剂盒，昨天做出来的结果不错，带清晰背景干净，但是非甲基化也有大小相似的带出来（样本是甲基化的），怎么回事？

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请问你在修饰过程中有哪些需要特别注意的吗?或者是你有什么样的心得,能交流一下吗?
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yychen[使用道具]
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发表于 2016-3-3 16:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有可能是部分甲基化呀
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