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一般有两种方法:动态和静态涂渍法
a、动态涂渍法:动态法系以惰性气体压力推动固定液溶液通过毛细管柱,在柱内壁上留下一层液膜。固定液的浓度一般为10%-20%,。根据固定液黏度和极性不同,选择二氯甲烷或丙酮作溶剂。操作时需在毛细管柱尾连接一根与柱子内径相同、长度约10m的废毛细管,以免溶液走到柱尾时速度发生变化。柱子的另一端插入固定液溶液中,用高压氮气把固定液溶液压人柱内。当液体到达柱体积的1/5时,将插入固定液中的毛细管柱拉起离开液面。用N2气推动溶液的液栓向前移动,速度为2-6cm/s,不得超过10cm/s。涂完后柱子继续通N2气3-4h,以完全除去溶剂。
动态法涂渍固定液速度快,但常常得不到均匀的液膜,重复性较差,柱效也比较低。为了提高动态法的效果,人们不断提出改进的方法。Levy等人提出一种限制流速的办法,将装置置于要涂渍柱的后边,在涂渍过程中使溶液流动速度稳定。也可采用汞塞法提高动态法的效果:往色谱柱管中吸入柱长10%的固定液溶液,停止抽空,使毛细管入口离开液面,让液栓后的弯月面移动几厘米。然后把柱人口处擦干净,取一小滴干净的汞放人管中,使汞塞长度为8--10cm,举起毛细管人口端以重力使汞塞进入柱中。把毛细管柱平放在没有对流风的桌面上,并用一块玻璃片盖在毛细管平面上,在毛细管末端装一段缓冲柱。施加一定压力使汞塞向前移动,速度约为0.5—0.7cm/s,待液体离开毛细管柱之后,取下缓冲柱。加大气体流量吹扫色谱柱20min,然后进行色谱柱的老化。
b、静态涂渍法:静态涂渍法的优点是重现性好,柱效高。其方法要点是把固定液的稀溶液(2-20mg/ml)用真空系统吸人毛细管柱中,一端封口,从另一端抽真空,在低于溶剂沸点10~15℃的恒温条件下使溶剂慢慢蒸发出去。这样在管壁留下一层薄薄的液膜。在静态涂柱的方法中,毛细管口的密封是一个关键性问题,溶剂与封口的交界面不能留下气泡,否则它将会把柱内的部分或全部涂渍液带出柱外。
为了缩短制作柱子的时间,选用溶剂时除考虑对固定液的溶解性能外,还应尽量选用挥发性强的。例如,一支20m长、内径为0.32mm的毛细管柱在室温下蒸发,若用二氯甲烷作溶剂需要15h,而选用正戊烷只需要8h。Kong等人提出了高温(85℃)下的静态涂渍法,加快了溶剂的挥发速度。国内徐秉玖等人改进了这一方法,建立了所谓自由逸出静态涂渍法。该方法是在高于溶剂沸点75℃或80℃的恒温条件下进行。不需抽真空使溶剂自由挥发,蒸发溶剂时在毛细管柱上接上一段缓冲柱增加阻力。这种方法简便,涂渍速度快,柱效高,可用于各种柱径和固定液的涂渍。