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标题:【求助】关于样品处理挥干后复溶的问题

ladyhuahua[使用道具]
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【求助】关于样品处理挥干后复溶的问题

文献中在样品处理时,经过萃取或spe后,会进行挥干-复溶,经常会见到使用100uL的溶剂或洗脱液进行复溶。
但是在我们的实验中发现使用100uL进行复溶并不容易,我们的样品基本是血液、尿液、器官等。
前处理后,使用100uL进行复溶后,不太容易转移到样品瓶中进样,特别是有时还要复溶后进行离心或过膜进行净化。
想问一下,使用少量溶剂或洗脱液进行复溶怎么操作?是不是有特殊的仪器?还是有什么技巧?
谢谢!!!
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如影随形[使用道具]
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样品蒸干后复溶操作的难易这个要根据您的复溶体积来判断,也就是说比如是用旋蒸蒸干的,因为旋蒸瓶的内表面积比较大,要想用1ml以下的溶剂体积复溶且要完全(也就是保证数据的准确性)这个比较困难,但是如果用氮吹浓缩的,因为氮吹浓缩时是渐渐集中于底部那一小点上,这样小体积定容相对容易些。不过用100uL的溶剂或洗脱液进行复溶,感觉要想完全可能也不是太好操作,我们复溶时用超声波助溶效果不错,您可以试试。
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iii_ii[使用道具]
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100ul确实有点少
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wiwi[使用道具]
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为什么不用1毫升呢?呵呵
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cj_mondy[使用道具]
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用内插管啊
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大海啊故乡[使用道具]
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我们用的标准都是1mL复溶的
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生物样品由于来源有限,样品量非常小,所以前处理的样品使用量也很小(我们多用10~50uL,蛋白沉淀),如果是液液萃取或固相萃取也不过用100~200uL,所以不能大体积复溶,否则样品被稀释,降低了检测灵敏度。
因此我们用到复溶时,会根据待测化合物的性质,配制不同比例的甲醇-水溶液或乙腈-水溶液进行复溶,并用甲酸、乙酸、氨水等调节酸碱度,偶尔也会加入丙酮、异丙醇等助溶,一般采用涡旋震荡溶解。当使用高比例有机溶剂时要注意溶剂效应(尤其是乙腈)及溶剂挥发引发的浓度改变(数百个样品长时间序列进样,通常要有内标);实在溶解效果不佳,会超声溶解或适当增大溶解液体积至200~300uL。、
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9900[使用道具]
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生物样品前处理后一般用EP管在氮吹仪吹干,100-200ul复溶,然后高速离心取上清到内插管再放进进样瓶。
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queen[使用道具]
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生物样品由于来源有限,样品量非常小,所以前处理的样品使用量也很小(我们多用10~50uL,蛋白沉淀),如果是液液萃取或固相萃取也不过用100~200uL,所以不能大体积复溶,否则样品被稀释,降低了检测灵敏度。
因此我们用到复溶时,会根据待测化合物的性质,配制不同比例的甲醇-水溶液或乙腈-水溶液进行复溶,并用甲酸、乙酸、氨水等调节酸碱度,偶尔也会加入丙酮、异丙醇等助溶,一般采用涡旋震荡溶解。当使用高比例有机溶剂时要注意溶剂效应(尤其是乙腈)及溶剂挥发引发的浓度改变(数百个样品长时间序列进样,通常要有内标);实在溶解效果不佳,会超声溶解或适当增大溶解液体积至200~300uL。、
谢谢!

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就像您回复里说的:“样品被稀释,降低了检测灵敏度。
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yjf1026[使用道具]
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生物样品由于来源有限,样品量非常小,所以前处理的样品使用量也很小(我们多用10~50uL,蛋白沉淀),如果是液液萃取或固相萃取也不过用100~200uL,所以不能大体积复溶,否则样品被稀释,降低了检测灵敏度。
因此我们用到复溶时,会根据待测化合物的性质,配制不同比例的甲醇-水溶液或乙腈-水溶液进行复溶,并用甲酸、乙酸、氨水等调节酸碱度,偶尔也会加入丙酮、异丙醇等助溶,一般采用涡旋震荡溶解。当使用高比例有机溶剂时要注意溶剂效应(尤其是乙腈)及溶剂挥发引发的浓度改变(数百个样品长时间序列进样,通常要有内标);实在溶解效果不佳,会超声溶解或适当增大溶解液体积至200~300uL。

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你说的很详细,我们的也差不多也是这样的处理的。
加入1mL的溶剂去复溶的情况比较少用!如果遇到加入小体积不溶解的情况,我们的办法一般是做个预实验,尝试下你所说的不同复溶剂,然后超声,如果不还是不溶解,最后一步可以离心把不溶物处理掉,然后分析。内标的在沉淀的时候加入。
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