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质粒提取数量少,只是质粒拷贝数低,裂解的菌液量少或者不充分,柱子回收效率不高的问题!
有时候按照正规操作提取质粒,也有提不出来的现象是,可能是质粒丢失了-原因不知!
楼主可以这样:
1对冻存的原始菌液做抗性划线培养,一来借助抗生素纯化质粒,二来也提高了菌活性液。
2随机挑选几个单克隆扩摇,用报告基因或者启动子序列作为Pcr对象进行检测或者合适酶的酶切检测验证-可以放后面做,一般都对!
3最大限度地提高菌体活性,先对正确的克隆小管扩摇,然后再抽取新鲜菌液再扩摇!
4注意培养条件,培养时间不宜过长,一般8-12小时或15小时以内吧!
5按比例加大样试剂总量,提取过程注意几个细节,比如缓慢混匀,裂解后静止等!
6用60度左右预热的水洗脱,洗脱两遍,注意水的用量。
7可以加多水洗脱后,利用抽真空法浓缩质粒!
8有些盒子对质粒大小也有要求,应细看说明书!