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标题:【求助】表达的质粒已经测序确认开放阅读框内序列没问题

冰激凌[使用道具]
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发表于 2016-4-2 12:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

兄台，你看我这个分析的对不对，我的上样缓冲液里没有加β-巯基乙醇，但是目的蛋白氨基酸序列里含有半胱氨酸，是不是会形成二硫键使目的蛋白没有完全打开，最终导致跑出来的条带偏小？？？
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美人鱼[使用道具]
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发表于 2016-4-2 12:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

如果是分子间形成二硫键，形成二聚体或多聚体，分子量会偏大；如果是分子内形成二硫键，分子量不变
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跳跳哈里[使用道具]
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发表于 2016-4-2 12:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

学习了，不过分子形状对分子量大小也有影响吧，分子内形成二硫键应该体积变小，是不是分子量要相对小些？
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发表于 2016-4-2 12:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

我最近也出现了这种问题，请问楼主现在找到原因了么
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发表于 2016-4-2 12:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

你好，正在做原核表达，想请问一下表达载体应该怎么选择尼？后期是要用纯化目的蛋白做抗体的，pET-22，pET-28，pET-30，我应该怎么选择尼？
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燕子@[使用道具]
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发表于 2016-4-2 12:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

最近做表达，也出现了这个问题。蛋白一部分上清表达，一部分包涵体，上清为20KD，包涵体尿素溶解后只有14.用的PET28A载体，测序没有问题，实在不知道什么原因了
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