PCR仪 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】总RNA电泳18s比28s亮很多是什么原因？

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】总RNA电泳18s比28s亮很多是什么原因？

IAM007[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75217
精华 0
积分 464
帖子 608
信誉分 100
可用分 3861
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态 离线
1

发表于 2016-4-4 21:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】总RNA电泳18s比28s亮很多是什么原因？

我这两天抽提的总RNA 凝胶电泳总是18s的亮度超过28s很多，28s跟5s的亮度一样甚至还要暗。
请教高手，这是不是降解啊？
我印象中的降解是5s条带变亮，但是28s不会明显比18s暗啊。这种情形第一次碰到。请高手帮忙指点！不甚感激！


查看积分策略说明
附件
2016-4-4 21:41
12105518.jpg (13.91 KB)
 
顶部
ha111[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 72969
精华 0
积分 821
帖子 1239
信誉分 101
可用分 7048
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-16
状态 离线
2

发表于 2016-4-4 21:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

个人认为是加样量多了，还有溶解时间短了，跑胶时间短了些，不知道，你的上述时间是多少？
顶部
IAM007[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75217
精华 0
积分 464
帖子 608
信誉分 100
可用分 3861
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态 离线
3

发表于 2016-4-4 21:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢LS！
这个样本的浓度是32，A260/A280为1.732，加样量1ul，100V，跑了30分钟。因为没有加Marker，可能不大好对比。
我以前跑胶的量多得多，电压时间也是这样，可是不是这样的结果。
下面我以前的结果，都是这样的。


查看积分策略说明
附件
2016-4-4 21:45
18863238.jpg (7.58 KB)
 
顶部
dmg[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74197
精华 0
积分 315
帖子 330
信誉分 100
可用分 2457
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-8
状态 离线
4

发表于 2016-4-4 21:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼主，你以前的电泳时变性电泳，效果很好啊！怎么跑出的？
顶部
hulu呼噜[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77048
精华 0
积分 298
帖子 275
信誉分 100
可用分 2196
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-12
状态 离线
5

发表于 2016-4-4 21:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
个人感觉应该是降解了吧，就像下边的那张电泳图，好的电泳图28s应该比18s要亮的多。
顶部
ilovegaga[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 108892
精华 0
积分 301
帖子 262
信誉分 100
可用分 2075
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-5-15
状态 离线
6

发表于 2016-4-4 21:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可以肯定的说RNA 发生了降解.我开始提RNA 时也是这个样子.
顶部
IAM007[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75217
精华 0
积分 464
帖子 608
信誉分 100
可用分 3861
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态 离线
7

发表于 2016-4-4 21:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 dmg 于 2016-4-4 21:46 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

楼主，你以前的电泳时变性电泳，效果很好啊！怎么跑出的？

我跑的不是变性胶，就是普通的凝胶，0.8％浓度的，100V跑二、三十分钟左右，呵呵！
以前都是抽提细胞株的总RNA，量多，降解了一部分还剩很多，不怕！
现在抽提的是临床骨髓标本的总RNA，细胞少了，问题也多了！
顶部
IAM007[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75217
精华 0
积分 464
帖子 608
信誉分 100
可用分 3861
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态 离线
8

发表于 2016-4-4 21:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 ilovegaga 于 2016-4-4 21:46 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
可以肯定的说RNA 发生了降解.我开始提RNA 时也是这个样子.

那你后来是怎么样改进的啊？请教哦！
顶部
dog002[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76386
精华 0
积分 916
帖子 1452
信誉分 100
可用分 8133
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-4
状态 离线
9

发表于 2016-4-4 21:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我以前提取RNA的时候,Trizol试剂还没有很好的市场, 我们那个时候是用自己配制的试剂提取的, 浪费了很多很很的时间, 结果都不很理想.你要想得到好的结果,首先要弄清楚RNA 提取所要注意的事项, 另外还需要一定的经验. 总之我个人认为除了所用器具和试剂符合要求外,环境也是一个非常值得注意的地方.
顶部
yhtfyl[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 415651
精华 0
积分 204
帖子 127
信誉分 0
可用分 605
专家分 0
阅读权限 255
注册 2023-2-21
状态 离线
10

发表于 2023-2-24 08:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
感谢楼主分享，受教了
顶部