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标题:【求助】pcr引物问题

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发表于 2016-4-6 16:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】pcr引物问题

请问pcr引物，上下游引物长度可以不同吗？急！！
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65urh[使用道具]
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发表于 2016-4-6 16:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可以的！
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any333[使用道具]
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发表于 2016-4-6 16:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

PCR扩增并不要求上下游引物一定要相同长度。
但是，如果上下游引物长度相差太远，并不利于扩增反应的进行。这一点可以从primer5.0中的引物评分可以看出来。
因此，除非迫不得已，我建议你将两条引物长度设计的相近，这样引物评分要高一些。也有利于扩增反应的进行。
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xueyouzhang[使用道具]
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发表于 2016-4-6 16:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

上下游引物长度可以不同
主要是两条引物的Tm值要接近
不然会降低扩增效率
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xyw5[使用道具]
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发表于 2016-4-6 16:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我在用primer p 5.0时，在搜索引物时为什么不能是同样的长度？
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发表于 2016-4-6 16:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可以不同，但长度都要在18~30bp之间，TM之差最好不要超过10度
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发表于 2016-4-6 16:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
上下游引物长度可以不同,世界上没有绝对的事情,开个玩笑.
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发表于 2016-4-6 17:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

用Primer设计的7个NONE的引物也不见得就是万能的，当然了，它至少考虑了引物设计的几个关键－－－fp和 rp长度最好控制在18－25个base，Tm值相差小与5，GC含量相差小与10％。但另一方面，引物的基因特异性却要靠自己来把握，注意3｀端的5个碱基一定要保守，建议用BlockMaker服务器进行特异性验证。其实引物设计无非是解决两个矛盾，即PCR可行性与基因特异性之间的矛盾，二者很难兼顾，所以只要找到最佳平衡点就行了，没有完美的Primer pairs，只有现实可行的idea和protocol,Try U Best And U Will Make It
推荐Primer5，DNAStar，Oligo 6三个软件联用，再借助BlackMaker服务器验证。Good luck:）
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finger[使用道具]
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发表于 2016-4-6 17:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你好，向你请教 “BlockMaker服务器” or“BlackMaker服务器” 的网址。
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pore[使用道具]
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发表于 2016-4-6 17:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请教一下，我现在需要在蟾蜍中检测是否存在一个基因（基因是未知的），它的同源基因在牛蛙和北极豹蛙中有，我想知道我的引物该怎么设计？拜托各位了，很急的
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