PCR仪 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】甲基化特异性PCR的修饰问题

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 39  3/4 ‹‹1234››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】甲基化特异性PCR的修饰问题

33号[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 74277
精华 0
积分 549
帖子 757
信誉分 100
可用分 4611
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-9
状态 离线
21

发表于 2016-4-7 15:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我还没有完全明白，不过这里到是有这样的结果。文章见
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=1623846&sty=3&keywords=%BC%D7%BB%F9%BB%AF')
下面附件中标记处
这里的解释是标本4-6中既含有甲基化的等位基因，也含有未甲基化的等位基因。我的理解是标本的DNA经亚硫酸盐不完全处理，因为对于某一个个体的DNA，他/她的基因是否甲基化和/或甲基化的水平在一定情况下（比如你已经取到的标本中）是一定的。希望战友再给出确定的解释。
顶部
33号[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 74277
精华 0
积分 549
帖子 757
信誉分 100
可用分 4611
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-9
状态 离线
22

发表于 2016-4-7 15:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

建议看这个帖子，很有启发。
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=2704574&sty=1&tpg=1&age=0')
顶部
33号[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 74277
精华 0
积分 549
帖子 757
信誉分 100
可用分 4611
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-9
状态 离线
23

发表于 2016-4-7 15:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我知道这个网站，上面的protocol是手工修饰，我用的是试剂盒，昨天做出来的结果不错，带清晰背景干净，但是非甲基化也有大小相似的带出来（样本是甲基化的），怎么回事？

==============================================================================================================

我个人认为可能是：
首先，你能否保证你的标本就是完全甲基化的呢？如果使用的是非细胞系标本（如手术后组织标本），是无法保证在完全甲基化标本内没有参杂未甲基化DNA的
其次，甲基化可以分为完全甲基化，完全未甲基化，还有半甲基化（即一条完全未甲基化，而另一条则完全甲基化，事实上这就是所谓的基因印迹Gene Imprinting）这在人类都可能是正常的。
顶部
ending[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76092
精华 0
积分 771
帖子 1242
信誉分 100
可用分 6981
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-1
状态 离线
24

发表于 2016-4-7 15:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
修饰PCR和MSP的反应条件一致吗,它们除了引物不一样,其他条件一样吗
顶部
33号[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 74277
精华 0
积分 549
帖子 757
信誉分 100
可用分 4611
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-9
状态 离线
25

发表于 2016-4-7 15:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 ending 于 2016-4-7 15:11 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
修饰PCR和MSP的反应条件一致吗,它们除了引物不一样,其他条件一样吗

不知道你说的修饰PCR是什么东东啊？？
顶部
wu11998866[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73743
精华 0
积分 569
帖子 797
信誉分 100
可用分 4850
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-27
状态 离线
26

发表于 2016-4-7 15:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我现在做Hela细胞系的甲基化，文献报道是完全非甲基化的，可是我用两对引物分别做出来甲基化和非甲基化两种结果（引物都是引用文献里的），而且每批修饰后的MSp，有时是甲基化，有时是非甲基化，那位大侠能帮我分析一下是怎么回事，谢了先
顶部
45778[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 117864
精华 0
积分 272
帖子 283
信誉分 100
可用分 2141
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-12-7
状态 离线
27

发表于 2016-4-7 15:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不好意思,是测序PCR,其引物包括目的基因的上下游片断.不包括CpG位点.
顶部
555444[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 118099
精华 1
积分 359
帖子 413
信誉分 102
可用分 2836
专家分 10
阅读权限 255
注册 2013-12-9
状态 离线
28

发表于 2016-4-7 15:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我考虑是不是细胞存在亚系的问题？
顶部
3.14[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 117870
精华 0
积分 275
帖子 290
信誉分 100
可用分 2171
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-12-7
状态 离线
29

发表于 2016-4-7 15:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我考虑是不是细胞存在亚系的问题？
我用的细胞是同一瓶同一次提的DNA,修饰,MSP,但是不同的引物,就有不同的结果
顶部
小荷尖尖[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 69993
精华 1
积分 333
帖子 321
信誉分 102
可用分 2451
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-8-3
状态 离线
30

发表于 2016-4-7 15:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我现在做Hela细胞系的甲基化，文献报道是完全非甲基化的，可是我用两对引物分别做出来甲基化和非甲基化两种结果（引物都是引用文献里的），而且每批修饰后的MSp，有时是甲基化，有时是非甲基化，那位大侠能帮我分析一下是怎么回事，谢了先

=========================================================================================

我认为你应该先分析一下你的引物是否特异，如CG位点的含量是否过少，再设计一对引物试试是否结果一样？
顶部
 39  3/4 ‹‹1234››