【求助】用sybr green好还是用TaqMan探针好? - 经验共享

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标题:【求助】用sybr green好还是用TaqMan探针好?

xyw5[使用道具]
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发表于 2016-4-7 16:34 资料个人空间短消息加为好友

小中大

sybr green 和TaqMan 探针对于定量PCR的应用原理是不一样的。sybr green 是结合在双链的产物上的，而TaqMan 探针是特异性的针对目的片段设计的带有荧光标记的互补单链序列。就特异性和准确性而言，sybr green 方法不如TaqMan 探针，我在以往的实验中看到的结果也是这样的。不过TaqMan 探针的造价比较高，每条目的片段都要合成一条探针，如果同时测还需要五种荧光基团都能检测到的定量PCR仪，估计不可行。我不太明白你所说的检测五种细菌是什么意思，五种质粒吧，需要定量检测这么精确吗，而且定量PCR对这种检测目的真的有意义吗？如果是检测细菌的量，可否有其他的和细菌功能相关的办法？

mamamiya[使用道具]
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发表于 2016-4-7 16:36 资料个人空间短消息加为好友

小中大

如果经费许可，我建议你用TaqMan探针

DDD[使用道具]
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发表于 2016-4-7 16:36 资料个人空间短消息加为好友

小中大

用sybr green 好,TaqMan探针价格高.只要你引物设计好,在一块板上分五孔同时检测可以达到你的要求,不过一定要有内标,否则不能定量.如果有引物二聚体干扰,可通过提高读板温度来消除,一般引物二聚体的Tm值<80度.

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