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标题:【求助】关于Realtime的溶解曲线

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发表于 2016-4-8 08:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】关于Realtime的溶解曲线

各位，昨天做Realtime时，出现奇怪的溶解曲线，想请教一下大家，这是什么原因，谢谢！跑胶的条带还是比较特异的，Realtime的结果重复两个孔之间的误差还是可以接受的，我怀疑是模板的退火温度太高，导致没有完全溶解，请大家看下溶解曲线，帮忙分析下，先谢了！
第1张是一个基因PCR的Raw的溶解曲线，第2张是其Derivative的溶解曲线，第3张是另一个基因PCR的Raw的溶解曲线，第4张是其Derivative的溶解曲线，第5张是Realtime的条件。


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发表于 2016-4-8 08:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

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 小中大
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发表于 2016-4-8 08:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

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发表于 2016-4-8 08:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

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发表于 2016-4-8 08:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

真的好奇怪啊，我刚刚开始做realtimePCR,不是很理解为什么会出现这种溶解曲线，特别是前三张，按理说应该是有一个Tm值处的高峰来表示大量解链过程的，第四张倒是可以通过Tm值过高来解释。请问wclbdyxb现在找到原因了吗，期待回复哦
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发表于 2016-4-8 08:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

嗯，原因应该就是PCR产物的Tm过高，出现这个的原因和机器默认的条件有关，可以把溶解曲线的最后1个温度改到98度，就能出现那个峰了
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发表于 2016-4-8 08:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也遇到了这个问题。我们的仪器是专门的一个老师操作的，出现了像心电图样的溶解曲线，我觉得是那个老师不会设置才出现的这种情况，我的96个样本都白费了
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发表于 2016-4-8 08:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
求助，我的溶解曲线也是象心电图样，有的连CT值都没有。各位高手，请给点意见或建议，好吗？谢谢了。
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