小中大 黄芩含量测定方法(黄芩苷) 来源: 作者:ocean
黄芩为唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi 的干燥根。2005版《中国药典》一部采用高效液相色谱法测定其黄芩苷的含量，文献报道的含量测定方法较多，主要有高效液相色谱法、薄层扫描法和紫外分光光度法等。
一、高效液相色谱法
2005版《中国药典》黄芩含量测定项下：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-水-磷酸(47：53：0.2)为流动相;检测波长为280nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不得低于2500。
供试品溶液的制备：取本品中粉约0.3g，精密称定，加70%乙醇40ml，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置100ml量瓶中，用少量70%乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀。精密量取1ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
文献报道的采用HPLC法测定黄芩苷的含量，所用的色谱条件较多，按照常用的流动相系统介绍。
A：甲醇-水-磷酸系统：
①Waters 600 高效液相色谱仪;Shim-pack ODS C18柱(150mm×6.0mm);流动相为甲醇-0.4% 磷酸水溶液(45：55);流速1.0ml/min;检测波长280nm。
②日本岛津LC-4A高效液相色谱仪;色谱柱: ZORBAX sb-C18 ( 4.6mm×25cm );流动相：甲醇-0.4% 磷酸( 1∶1);流速1.0mL/min;室温25℃±2℃;检测波长280nm。
③waters-600 高效液相色谱仪;色谱柱: ODS C18 柱(610nm ×150nm);流动相：磷酸(1→146)-乙腈(18：7);流速1ml/min;检测波长277nm;柱温: 25℃。
④Waters 515 高效液相色谱仪;色谱柱：HangBang C18 (200mm×4.6mm, 5μm);流动相：甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2);检测波长280nm;流速为1.0mL/ min。
⑤岛津LC-2010 高效液相色谱仪;色谱柱C18反相柱(150mm×4.6mm);柱温40℃;流动相：甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2);流速1.0ml/min;检测波长280nm。
样品一般用甲醇、流动相、70%乙醇超声或回流提取，也有蒸馏水为提取溶剂的。
B：甲醇-水-冰醋酸系统：
① 液相色谱仪(美国光谱物理公司);色谱柱: DiamonsilTM (钻石) C18反相柱( 4.6mm ×250 mm,5μm);流动相：甲醇-乙腈-水-冰醋酸(25：22：75：1);柱温室温;流速1.0 ml/min;检测波长为277nm。供试品溶液的制备：咳喘静糖浆用正丁醇5分3次萃取(以PbAC试液检查母液中黄芩苷为负反应) ,取上层液合并, 80℃水浴蒸干。残渣加4ml甲醇溶解后通过柱层析(中性氧化铝, 100～200目, 1cm) ,用15mL甲醇洗脱,收集全部滤液,蒸干,残渣用5mL甲醇溶解后,用甲醇定容至25mL。精密量取上述溶液3mL,用流动相稀释定容至10 mL,作为供试品溶液。(金 虹，“高效液相色谱法测定咳喘静糖浆中黄芩苷含量的研究”，西南科技大学学报，2005，20(3))
②HP-1100高效液相色谱仪(美国惠普公司);色谱柱:ODS C18 柱(Zobax),粒径5μm ,柱径4.5mm,柱长250mm;) 流动相:甲醇-水-醋酸= 45∶55∶1;流速2.0ml/min;柱温40℃;检测波长:274nm。
③大连依利特P 200 Ⅱ液相色谱仪;色谱柱:十二烷基硅烷健合硅胶柱(25mm×4.6mm);流动相：乙腈-0.3%磷酸水溶液( 100：400);检测波长203nm;流速1.0 ml/min ;柱温室温。
C：甲醇-磷酸二氢钠系统：
①岛津LC-10ATvp高效液相色谱仪;Shim-pack ODS C18柱(150mm×6.0mm)，流动相为甲醇-磷酸二氢钠(36：64)，柱温50℃，检测波长为280nm。
②Agillent1100 高效液相色谱系统;色谱柱：C18柱(4.6mm×260mm);流动相:甲醇-0.2mol/L 磷酸二氢钠(60∶40) ,用磷酸调pH至2.7;流速1.0mL/min;检测波长275nm;柱温室温。
另外，不常使用的HPLC条件，如：
HP1100 高效液相色谱系统;色谱柱: LUNA C18 (2)，4.6mm×150mm，5μm;检测波长为318 nm;柱温35℃;流速0.9mlmin。流动相梯度洗脱：0～9分钟，0.4%磷酸溶液：87%，乙腈：13%;9～10分钟，0.4%磷酸溶液：87～75%，乙腈：13～25%;10～20分钟，0.4%磷酸溶液：77%，乙腈：25%;20～21分钟，0.4%磷酸溶液：75～87%，乙腈：25～13%。(陈长水，“梯度洗脱HPLC法同时测定双黄连口服液中绿原酸和黄芩苷含量”，安徽医药，2005，9(10))
Waters-515 型高效液相色谱仪;色谱柱: Lichrospher C18 ( 4.6×200mm，5μm);流动相:甲醇-0.05%三氟乙酸(47∶53);流速1.0mL/ min;柱温30℃;检测波长280nm。样品以75%乙醇为提取溶剂。(包贝华，“反相高效液相色谱法测定清热消炎冲剂中黄芩苷的含量”，中国实验方剂学杂志，2005，11(4))
二、薄层扫描法
谢玲等用双波长薄层扫描法测定芩柏烧伤液中黄芩苷的含量。采用CS-900双波长薄层扫描仪，硅胶GF254板，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(7：3：1：1)为展开剂，双波长反射线性扫描：λS=297nm，λR=365nm。样品用石油醚脱脂后，经过D101型大孔吸附树脂处理，收集40%乙醇洗脱液。
张武标等用薄层扫描法测定复方逍遥合剂中黄芩苷含量。采用Scanner 3 型薄层扫描仪，固定相为聚酰胺薄膜，以乙酸为展开剂，于275nm波长处测定吸收度。
三、薄层-比色法
王淑珍等用薄层-比色法测定中成药清喉咽合剂中黄芩苷的含量，采用CS120-02 紫外分光光度计(日本岛津公司)。固定相为聚酰胺薄膜上,以36%乙酸为展开剂,展开吹干后于紫外分析仪365nm下剪下黄芩苷,用二甲基甲酰胺洗脱至薄膜上无黄芩苷为止(荧光灯下检查) ,挥去二甲基甲酰胺,用50%乙醇溶解至10ml,测定吸收度。样品采用单渗滤法用57%乙醇浸渍。实验操作中,注意点样要集中,剪取谱带要完全。
四、紫外分光光度法
张涛等采用络合物萃取-紫外分光光度法测定平痤散中黄芩苷的含量。采用751-GW型分光光度计，测定方法与条件为：精密量取对照品溶液适量(含黄芩苷 180μg以内)，置分液漏斗中并加水稀释至15ml,依次精密加入0.05%硫酸铜溶液4ml,氨水溶液3ml,2.4%溴化十六烷基三甲铵溶液3ml 混匀以形成络合物,精密加入正丁醇10ml振摇萃取3min,加4ml饱和氯化钠水溶液破乳;放置分层后取正丁醇层离心,用干燥滤纸过滤,以取对照品溶液 0.0ml的正丁醇萃取液为空白,在20～35℃左右于(262±1)nm 处测定吸收度。
