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标题:【求助】DNA甲基化(CpGenome™ DNA Modification...

wanglaoshi[使用道具]
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发表于 2016-4-8 15:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 菜鸟丙 于 2016-4-8 15:58 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
甲基化处理后我没有测，但跑过电泳，看不到条带。
你可以提高模板量试一试，另外再多试几个温度，延长变性、反应及退火时间，我都使用1min，40 cycles。 ...

我的预计产物只有200bp。
看了这里很多的MSP帖子，似乎大家都很困难。
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HPLC使者[使用道具]
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发表于 2016-4-8 15:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不知道你修饰后用玻璃奶珠沉淀后是否发现奶珠颜色有变化了呢?我的好象是变黑了的,考虑是提的DNA的纯度不够好,据成功者们的经验,MSP实验中除了引物的因素外就属DNA的纯度最重要了,所以我已经买了提DNA的试剂盒准备重新开始.如果还是不行的话就只好到外面去学习去了,如果大家有好的地方请帮忙推荐或者是联系一下,不胜感激!
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阿福[使用道具]
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发表于 2016-4-8 15:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 HPLC使者 于 2016-4-8 15:58 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
不知道你修饰后用玻璃奶珠沉淀后是否发现奶珠颜色有变化了呢?我的好象是变黑了的,考虑是提的DNA的纯度不够好,据成功者们的经验,MSP实验中除了引物的因素外就属DNA的纯度最重要了,所以我已经买了提DNA的试剂盒准备重 ...

不好意思，我不懂什么是玻璃奶珠？不过修饰过程中始终没有看到黑色的东西。
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HPLC使者[使用道具]
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发表于 2016-4-8 15:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
就是试剂3。
是的，MSP确实不好做，就是现在也不是每次都能成功。你的产物200bp应该好一点，我的产物只有100bp。
上海肿瘤所作的比较多，而且做得基因也比较多，他们好像都使用手工修饰的。
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 小中大
你的primer是标记的吗？我的是，在MSP总是看到dimer，和阴性对照一样的。唉....
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发表于 2016-4-8 16:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的没有标记，但我的从来没出现过二聚体。
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发表于 2016-4-8 16:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你认为230nm处吸收过高（盐和小分子物质）的可能性出错的地方是...？:I:I:I:I
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阿福[使用道具]
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发表于 2016-4-8 16:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
另外，“2.2.1 取旋盖1.5ml离心管，加水100µL，再加1.0µg DNA,最后加7µL 3M NaOH，混匀”
应该是改成：
2.2.1 取旋盖1.5ml离心管，加水90µL，再加1.0µg DNA（100ng/µl）,最后加7µL 3M NaOH，混匀
是吗？
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发表于 2016-4-8 16:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

问:2.2.1 取旋盖1.5ml离心管，加水90µL，再加1.0µg DNA（100ng/µl）,最后加7µL 3M NaOH，混匀
是吗？
答:这个是要求加了水后总体积达到100ul的,加多少水就要看你是加多少ul的DNA了.
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HPLC使者[使用道具]
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发表于 2016-4-8 16:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
说明书上的意思100ul可能不包括7µL 3M NaOH，我没有把它算进去。
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