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标题:【求助】DNA甲基化(CpGenome™ DNA Modification...

toy[使用道具]
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发表于 2016-4-8 16:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我没有做过甲基化方面的东西，但今年暑假时听过这方面的讲座，是我们医院出去的一个牛人，去美国五年了，一直做甲基化方面的东西，做了很多工作，在SCI上发表文章11篇，我把他的E-mail pm给你，跟他讨论应该能解决部分问题。并请为我保密他的邮箱！！！
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阿福[使用道具]
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发表于 2016-4-8 16:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

众位认为怎么样才能确认DNA的甲基化处理是成功的？因为MSP扩不出来，首先考虑Template的问题。
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yhn[使用道具]
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发表于 2016-4-8 16:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

以下是个人的经验，仅供参考：
说明：只列出了和onobel不同的步骤：
2.2.1 取旋盖1.5ml离心管，加水和1.0µg DNA,总体积为100µL。最后加7µL 3M NaOH，混匀。
2.3.3 室温孵育5-10min，8000rpm 离心5分钟，弃上清，共2次。
2.3.4 加1ml70%乙醇，漩涡混匀，8000rpm， 离心1－2min，重复三次。
2.3.7 8000rpm 离心1min，直接加1ml90%乙醇，漩涡混匀，洗涤沉淀，离心弃上清，共两次。
2.3.10 65℃ 15min。高速离心2-3min，转移上清至另一Ep管中。
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阿福[使用道具]
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发表于 2016-4-8 16:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
非常感谢yhn的指点。请问你提及的“2.3.3 室温孵育5-10min，8000rmp离心5分钟，弃上清，重复2次。”是指离心后弃上清后重复离心一次，还是指包括前面的步骤重复一次（试剂Ⅲ5µL＋750µL试剂Ⅱ）？
同时我已经在和chemicon公司联系了，如果有回答了再与大家一起探讨。
总之，MSP有一定难度，但是办法总比困难多。
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发表于 2016-4-8 16:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
重复离心一次，除去残余的少量上清。
Good luck!
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131415[使用道具]
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发表于 2016-4-8 16:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问：chemicon 公司的CpGenome™ DNA Modification Kit 要多少钱的呢？有没有这个公司的电话呢？谢谢告诉！！
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发表于 2016-4-8 16:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

答：chemicon 公司的CpGenome™ DNA Modification Kit现在好象吉泰生物是总代理，他们给出的价格也是最低的，可以打8折，折后价是3180元，其他的代理好象都是给8.5折的.不过这个试剂盒好象都没有现货的,要3周才能到货!吉泰上海总部的电话是021-54262677,你自己打电话去问吧!
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发表于 2016-4-8 16:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

CpGenome的到货时间多久？
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发表于 2016-4-8 16:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
大约一周多就可到货
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发表于 2016-4-8 16:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
chemicon 公司的CpGenome™ DNA Modification Kit S7820说明书上提到要设计三对引物，请问野生型的一定需要吗？如果不要对实验会有什么样的影响？谢谢 ！
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