小中大【求助】求高人指点Bandscan及Qantity one分析结果!
各位战友:
本人行RT-PCR后琼酯糖电泳跑了下DNA,并要进行半定量分析。初次学习并使用了凝胶图像分析软件。试着用了Bandscan5.0及Quantity one两种软件对我的图片进行分析。意外的是两种软件得出的数据竟然存在出奇的差异。所以还请有使用过此两种软件的高人指点下,指出本人使用软件分析哪个环节存在问题。
首先,先看下面这张图片,此为我要分析的DNA电泳图片。上面的条带为目的条带,下面条带为内参。
Bandscan分析方法:
参照园子里贴子:“两分钟Step by step 学习凝胶分析软件BandScan” 回复:两分钟Step by step 学习凝胶分析软件BandScan - 丁香园论坛
按上述方法,通过软件框好目的条带及内参条带,最后途径是window/band data table/select band data/percent signal,最后得出目的条带及内参条带各自的灰度值占本泳道条带总灰度值的百分比,然后计算出目的DNA与内参的比值为:5.83017956,5.383062453,1.403072495,2.35895817,2.332600915,2.431437525(从左到右)。
Quantity one分析方法:
打开文件后通过volume菜单,下选择volume rect tool,然后通过鼠标手工框好目的条带及内参条带,最后点volume analysis report。最后计算目的条带与内参条带Density的比值。得出的数据为:1.380286471,1.364362557,1.225269624,1.191564837,1.289548934,1.186465237(从左到右)。
实在是不明白为何两种软件处理的数据相差这么远,还请指正。
谢谢了!