PCR仪 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】A260/A280的Ratio低与DEPC水有关么？

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 29  2/3 ‹‹123››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】A260/A280的Ratio低与DEPC水有关么？

小螺号[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74175
精华 0
积分 291
帖子 321
信誉分 100
可用分 2356
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-7
状态 离线
11

发表于 2016-4-9 10:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 831226 于 2016-4-9 10:33 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
50～100mg左右的组织加入1mlISOGEN都没有大问题。
homogenize后加0.2mlchloroform，12000rpm,15min,4℃还可以，只是楼主加入chloroform有没有剧烈震荡啊？这一步的剧烈振荡十分关键的，不然就可能有蛋白。
吸取上清注意了应该 ...

谢谢您的意见！
第一次做实验时，加入chloroform后确实没有震荡，结果chloroform都很安静地躺在下层，一点儿作用都没起，没办法又重新震荡离心了一遍，幸亏用的是练习用的sample。呵呵，现在回想起来还觉得挺好笑的。也感觉做实验确实能体会到失败是成功之母这样的道理。只是希望借助大家的帮助我能够顺利从这一步的失败中走出来。
顶部
65urh[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 118100
精华 0
积分 179
帖子 138
信誉分 100
可用分 1391
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-12-9
状态 离线
12

发表于 2016-4-9 10:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不好意思，我是新手，对相关的词汇都还没弄很明白，请问一下：TE是指？

======================================

TE就是TE buffer，TE缓冲液。祝实验成功！
顶部
45778[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 117864
精华 0
积分 272
帖子 283
信誉分 100
可用分 2141
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-12-7
状态 离线
13

发表于 2016-4-9 10:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
OD260/280 在提取组织RNA，进行RT-PCR等类似实验操作中，仅仅是个参考，只要确认自己的实验操作无误，比值1.3多也能RT成功，PCR做出很漂亮的条带来
OD值受很多因素影响，它的比值不如参考书上的那么标准，并不能完全代表你的实验结果不好
顶部
8princess8[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75310
精华 1
积分 664
帖子 821
信誉分 103
可用分 5056
专家分 20
阅读权限 255
注册 2011-10-21
状态 离线
14

发表于 2016-4-9 10:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
OD260/280 在提取组织RNA，进行RT-PCR等类似实验操作中，仅仅是个参考，只要确认自己的实验操作无误，比值1.3多也能RT成功，PCR做出很漂亮的条带来
OD值受很多因素影响，它的比值不如参考书上的那么标准，并不能完全代表你的实验结果不好
......

===============================================================================================================

谢谢您的意见！
我在看到OD260/280比值不理想后就停在这里了，一直反复找原因，重复试验，确实没再往下进行过。或许我该先做到最后试试看。呵呵，谢谢了！
顶部
33号[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 74277
精华 0
积分 549
帖子 757
信誉分 100
可用分 4611
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-9
状态 离线
15

发表于 2016-4-9 10:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我提的PNAOD 值一直都比较高 ,多数在2.0-2.1之间, 太高了也不好吧?我是拿DEPC水融RNA的, 也用来调零
顶部
kulee[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77361
精华 0
积分 615
帖子 849
信誉分 100
可用分 5127
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-16
状态 离线
16

发表于 2016-4-9 10:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我用比值为1.2的来做RT 也能做出来 所以我认为比值关系应该不大 不用太在意 做出来就可以了
顶部
zzzz[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 74598
精华 1
积分 656
帖子 967
信誉分 102
可用分 5638
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-12
状态 离线
17

发表于 2016-4-9 10:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
今天也做了第一次
浪费了好多试剂和时间，幸好最后还是有点结果：反转录的cDNA可以扩出阳性片段，目的片段却没出来
顶部
911[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73229
精华 1
积分 523
帖子 682
信誉分 102
可用分 4276
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-20
状态 离线
18

发表于 2016-4-9 10:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可能跟DEPC水的灭菌有关吧
顶部
u234[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77031
精华 0
积分 691
帖子 1081
信誉分 100
可用分 6196
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-12
状态 离线
19

发表于 2016-4-9 10:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
核酸样品的A260/A280值一般在1.7~1.9是比较合适，偏离这个值可能是由于蛋白含量偏高(A260/A280值大于2.0)、DNA样品中有RNA污染（比值小于1.7）、RNA中有机物如氯仿等污染（比值小于1.7）造成。值得注意的是：当样品中的脂肪含量较高，而使用的抽提方法又没有特别注意这一点时，比值也会偏低。DEPC水有影响，但不是根本性的问题。RNA的质量及浓度以在胶上鉴定为使用前的最终标准，以rRNA条带尖锐（sharp）且28S的亮度是18S的亮度的2倍以上为好。另外，不同组织、不同的RNA提取方法所得RNA跑胶时rRNA的条带数可能并不仅仅是28S和18S这2条，可能还有较大的条带，但与DNA的污染又明显不同，它们与点样孔的距离较远。一般来说，这样的RNA样品可能质量更好。
顶部
8princess8[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75310
精华 1
积分 664
帖子 821
信誉分 103
可用分 5056
专家分 20
阅读权限 255
注册 2011-10-21
状态 离线
20

发表于 2016-4-9 10:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 u234 于 2016-4-9 10:40 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
核酸样品的A260/A280值一般在1.7~1.9是比较合适，偏离这个值可能是由于蛋白含量偏高(A260/A280值大于2.0)、DNA样品中有RNA污染（比值小于1.7）、RNA中有机物如氯仿等污染（比值小于1.7）造成。值得注意的是：当样品中的脂肪含量 ...

到底是A260/A280值大于2.0有蛋白质污染还是有核算污染
顶部
 29  2/3 ‹‹123››