表界面物性测试

用排油圈法对生物表面活性剂进行定性或定量时，看不到文献中提到的排油圈，可能观察的方法不对，请各位前辈给予指教

终于找到一位同行,我也是做生物表面活性剂的,希望以后我们能多交流,我的QQ:289210614
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排油圈我做过,效果不错,但我只能做到定性,由于形成的排油圈有时不太稳定,做定量我个人认为不够准确
不知道你用的什么油,说说我的方法吧,
在直径12厘米的表面皿里加入50ml蒸馏水(千万不能用自来水)然后滴入30微升液体石蜡,然后在中间滴入20微升的发酵液,如果立即下沉,形不成排油圈说明没有表面活性剂,如果发酵液能在油滴上形成一个小液滴,你一定要有耐心,要等一会儿才会形成排油圈,有时十几秒,有时要一两分钟,液体石蜡一下就被排开,形成排油圈,不过,有的排油圈比较规则,有的不太规则,这要看你的菌种和表面活性剂的含量的多少,

上述适用于生物表面活性剂含量不是很大时,一般在排油圈直径在0-6厘米时比较准确,如果你的生物表面活性剂含量很高时,可以适当增加液体石蜡,或减少发酵液,以上方法是我在做生产生物表面活性剂筛选时用的,

我目前筛选出一株铜绿假单胞杆菌,效果很好,发酵后用上述方法已经不能测生物表面活性剂的含量了,我用了100微升的液体石蜡和一滴发酵液,排油圈都有10厘米,所以我准备用其它方法做生物表面活性剂的定量分析.你如果有好的方法的话,还希望能多多交流!!!!!

你的菌种的初步筛选是怎么筛的?是富集培养后,用血平板和油平板筛的吗?

是的,我是富集后,用油平板筛的

我也用了油平板可有些问题:
我先把原油和滤纸分别灭了菌,然后把滤纸浸满了原油,倒好培养基后,等它凝固了后再在上面盖上滤纸,最后再将富集培养液划到油平板上.放到35度下保温保湿培养.可原油没有凝住,我把平板倒置培养后,油都留下来了.不知道有没有冲走我接的菌种.
是不是我浸的油太多了啊?可不浸多我又怕滤纸不能完全浸透.
你用的擦镜纸有没有这样啊?还有你培养了多久才长出菌来的?
还有你用一般的葡萄糖平板筛出的菌产表面活性剂吗?要是也可以的话,就不用用血或是油平板了,那样到时先用排油圈法筛一下,然后直接测一下表面张力不就可以了.

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    6楼

加入的原油是不会凝的,不管你加多或加少,它都会流动,最好是培养基中不加原油,只用滤纸(滤纸一定要很薄的那种,如果没有的话,我也介意你用擦镜纸,)浸满原油就可以了,千万不能多,一多就会流动,而且平板一定要轻拿轻放,大概培养三到四天就可以看到菌,到六七天的时候就很明显了,不过菌落的形态不是普通平板上的那种,主要有两种情况,一种是形状不规则的连续的成片状的菌浇,另一种是分散的成点状分布的小菌落,然后就把这些菌划到普通平板筛单菌.
用一般的平板筛出的菌也有产表面活性剂的,这就跟你的取样有很大的关系,不能一概而论,我用的油平板筛出的菌都产表面活性剂,而且效果都不错,

我的油平板在35度下,三天就长出菌来了,我又培养了几天可没什么大的变化,并没有再长大.有的是连成片状的,有的分散成点状分布的小菌落.菌落很小啊!而且也看不到噬油斑,你的能看到吗?我是把富集培养液划线到油平板上的,后来我觉得涂布可能会更好些.
我的菌从外表上直观的看上去好象都是细菌.可我的富集培养液有两种,一种是富集细菌的,一种是富集霉菌和酵母菌的,富集培养液的配方主要是参照了"潘冰峰的生物表面活性剂的产生菌的筛选"的文章.不知为什么我总是筛不到霉菌和酵母菌?
现在没有噬油斑,那是不是就没有什么意义了?
或者既然这种菌能在以原油为碳源的培养基中生长,那就说明它能产表面活性剂呢?即使没有噬油斑也有用呢?
可我的原油培养基中原油不是唯一的碳源,酵母膏虽然含了很少的碳,可你就不能说原油是唯一的碳源了.
这些想法很矛盾,希望你能给我解答一下.

我油平板上长的菌和你描述的基本一致,也没看到噬油斑,其实我也不知道什么是噬油斑,我的富集培养液就是富集细菌的,没做霉菌和酵母的,油平板长出的菌还是很有研究价值的,我把油平板长的菌再划线划到普通平板上分离出单菌落后,进行发酵,然后测定了发酵液的表面活性,都不错,说明还是产了一定量的生物表面活性剂的,
一般认为细菌利用石油烃类作为碳源的话,那它应该是会产表面活性剂的,只不过有两种情型,一种是偶联在细胞壁上,另一种就是分泌到胞外,
如果你觉得酵母膏可能做为碳源的话,那你就不加酵母膏试试,应该也会长菌的,

不知你筛的菌的种类多不多?我目前只发现了两个种类,不过只是直观的从菌的外表上看过去,好象都是细菌.

我的也不多,好像就三种类型的,有铜绿假单胞菌