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标题:【求助】偶是MS的新手。最近在做个样品

aaby[使用道具]
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发表于 2016-4-10 11:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 QQ

 小中大

【求助】偶是MS的新手。最近在做个样品

偶是MS的新手。最近在做个样品，发现在用标准溶液进样的时候有很高的响应值。可是相同浓度情况下血样的提取溶液一点响应都没有。确信不是提取问题，因为在提取后的进样溶液中加入很高浓度的标准品也没有响应。实验用的柱子对样品几乎没有保留。
请问是否是基质使得质谱没有响应了？换能保留的色谱柱能解决这个问题吗？还有其他的可能原因吗？
大虾们帮助解决一下，谢谢！
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n111[使用道具]
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发表于 2016-4-10 11:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

我考虑的可能性：
1 提取后和标准品的峰位可能有偏差（但是感觉也不会偏差很大）。建议用空白血浆提取后加入标准品，进一针，采集时间长一点，包括前沿也切入质谱，看看是不是前沿出峰。
2 是不是进样溶液中药品分解了？比如药品应避光，或者溶样的溶液的ph不合适？
3 基质效应也有可能，建议做柱后补偿。
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yazi[使用道具]
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发表于 2016-4-10 11:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

楼上说的第二种和第三种情况应该都不是的。样品是非常稳定的。
是否是样品和血浆中的大量干扰杂质同时出峰，存在离子抑制，使得MS没有了响应？
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小熊妮妮[使用道具]
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发表于 2016-4-10 11:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

我认为样品在血浆中离子化效率低，导致质谱没有响应。应该改进提取方法，降低基质效应的影响
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钻石[使用道具]
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发表于 2016-4-10 11:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

今天选用了NH2柱，能把样品峰拖到比较长时间，可是还是没有出峰。改变了很多提取溶剂，结果都没有改变。不知道怎么办了，晕啊！
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钻石[使用道具]
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发表于 2016-4-10 11:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

If high concentration standard added to the extracted sample can not give you the signal, definitely there is something wrong with matrix. When you use LC-MS, try to remove ionic reagent in your matrix.
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大大[使用道具]
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发表于 2016-4-10 11:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

如果怀疑是基质效应，可以将标样加入水中并采用相同的提取方式提取后进样，看看是否出峰。

不知你说的不出峰具体是什么情况，质谱响应是多少（如果响应很高，则有干扰的可能）。另外，你用的是什么扫描方式，建议选用二级质谱扫描即MRM或SRM。

你可以将图谱发上来，这样比较直观一些。

如有不对之处，敬请指教！
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mimima[使用道具]
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发表于 2016-4-10 11:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

我将标样加入水中然后提取是有出峰的。
模式SIR和MRM都采用了，结果都没有响应。SIR的基线响应有1000多点，MRM的基线响应大概100左右。
因为这个样品是水溶性很大的物质，在一般的有机溶剂里都不溶，在稀酸中都能溶解。所以选择了一些提取方法1）加5倍体积甲醇（含1％醋酸）沉淀蛋白，离心上清进样；2）血浆中加适量酸后，用3倍量氯仿沉淀蛋白，离心，上清进样；3）加适量三氯乙酸沉淀蛋白，上清离心进样。结果都没响应，但是在没有血浆的情况下，采用上述三种方法提取，都是能出峰的。
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大花猫bb[使用道具]
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发表于 2016-4-10 11:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

我用的是Waters UPLC-MS/MS(TQD)。奇怪的是文献上，按相同的条件处理样品都是有响应的。
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jishiben[使用道具]
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发表于 2016-4-10 11:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

9楼

感觉应该是基质影响，1.是否流动相中有较大浓度的缓冲盐或者酸的添加？改用纯甲醇水或乙腈水或者减小添加物的浓度试试. 2.LC-MSD参数设置没问题吧。3.提取方法2不妥，最上层是水，中间是氯仿，下层是沉淀的蛋白？
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