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标题:【求助】合成多肽免疫动物,多肽难溶,欲加DMSO等溶解...

66小飞侠[使用道具]
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【求助】合成多肽免疫动物,多肽难溶,欲加DMSO等溶解...

如题所述,怎么办?:(
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jingling845[使用道具]
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1 溶解性是使用多肽时比较重要的问题。每个氨基酸都有其固有化学特性。如亮氨酸Leu、异亮氨酸Ile、颉氨酸Val是疏水性的,其他氨基酸如赖氨酸Lys、组氨酸His、精氨酸Arg是亲水性的。因此不同的多肽因其组成不同而具有不同的溶解性 。
(备注:在多肽溶解之前,建议您先用少量肽来试验最适溶解方法,只有当多肽完全溶解后,才能加入水或缓冲液将之稀释至最终浓度)
2. 一般情况下,多肽首先选择溶解在灭菌的蒸馏水或去离子水中 。如果这个肽是不溶于水的,且其是酸性的,加入温和的碱如0.1%的NH4OH能够增加肽的溶解度。相反,对于碱性的肽,温和的酸如0.1%的醋酸或TFA(三氟乙酸)能够帮助多肽溶解。
3. 在一些情况下,某些肽具有很高的疏水性时,不易溶解,可以用少量的DMF或DMSO帮助其溶解 ,这时推荐将多肽溶解于高浓度,然后用水或缓冲液将其稀释到正常的工作浓度。因为盐会导致疏水性多肽的聚合,所以必须在多肽完全溶解后加入缓冲液进一步稀释 。当您遇到这种情况时,请您注意以下几点说明:
(1)DMF或DMSO的使用有助于多肽的溶解,这是通过破坏多肽的二级结构而助溶。
(2)这种试剂的使用可能会对其生物活性及后续的研究工作造成干扰,请您在溶解考虑到这个问题 。
(3)虽然DMSO有毒,但是适量浓度应该对实验结果影响不大,但最好预实验证实一下合适的溶解浓度,而且必须设置相应的溶剂对照组
4.对于一些在弱酸、弱碱及有机溶剂中均不能很好溶解的多肽,您可以尝试超声波处理 ,超声有助于打碎颗粒增加肽在水中的溶解度。但在使用超声处理请注意: 超声会引起溶液发热从而造成多肽降解,所以您必须在冰上操作!
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jingling845[使用道具]
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1 溶解性是使用多肽时比较重要的问题。每个氨基酸都有其固有化学特性。如亮氨酸Leu、异亮氨酸Ile、颉氨酸Val是疏水性的,其他氨基酸如赖氨酸Lys、组氨酸His、精氨酸Arg是亲水性的。因此不同的多肽因其组成不同而具有不同的溶解性 。
(备注:在多肽溶解之前,建议您先用少量肽来试验最适溶解方法,只有当多肽完全溶解后,才能加入水或缓冲液将之稀释至最终浓度)
2. 一般情况下,多肽首先选择溶解在灭菌的蒸馏水或去离子水中 。如果这个肽是不溶于水的,且其是酸性的,加入温和的碱如0.1%的NH4OH能够增加肽的溶解度。相反,对于碱性的肽,温和的酸如0.1%的醋酸或TFA(三氟乙酸)能够帮助多肽溶解。
3. 在一些情况下,某些肽具有很高的疏水性时,不易溶解,可以用少量的DMF或DMSO帮助其溶解 ,这时推荐将多肽溶解于高浓度,然后用水或缓冲液将其稀释到正常的工作浓度。因为盐会导致疏水性多肽的聚合,所以必须在多肽完全溶解后加入缓冲液进一步稀释 。当您遇到这种情况时,请您注意以下几点说明:
(1)DMF或DMSO的使用有助于多肽的溶解,这是通过破坏多肽的二级结构而助溶。
(2)这种试剂的使用可能会对其生物活性及后续的研究工作造成干扰,请您在溶解考虑到这个问题 。
(3)虽然DMSO有毒,但是适量浓度应该对实验结果影响不大,但最好预实验证实一下合适的溶解浓度,而且必须设置相应的溶剂对照组
4.对于一些在弱酸、弱碱及有机溶剂中均不能很好溶解的多肽,您可以尝试超声波处理 ,超声有助于打碎颗粒增加肽在水中的溶解度。但在使用超声处理请注意: 超声会引起溶液发热从而造成多肽降解,所以您必须在冰上操作!
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多谢多谢,真是很复杂。这些多肽是(12肽)是根据筛选噬菌体肽库获得的表位合成的,所以不知其酸碱性,多肽从DNASTAR等软件能预测吗?
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jingling845[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 66小飞侠 于 2016-4-11 22:19 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
多谢多谢,真是很复杂。这些多肽是(12肽)是根据筛选噬菌体肽库获得的表位合成的,所以不知其酸碱性,多肽从DNASTAR等软件能预测吗?

可在线预测,详见
cuturl('http://www.expasy.org/tools/')
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66小飞侠[使用道具]
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我预测了一下,大部分的肽是酸性的,用PBS或者PBS+超声可以溶解(不过还是呈现细小混悬状态,勉强可以分装)。用水基本都不溶解。现在就是不知道DMSO对免疫动物是否有影响(因为有的样本先用DMSO也没有完全溶解)?
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11_hjx[使用道具]
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低浓度的DMSO是不会又毒性的,但是如小舟子说的,最好设立对照组比较观察。同时也要看你的多肽是做什么试验的,如果还需要进行载体的偶联,就不用太担心DMSO的影响 。
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shanzhapia696[使用道具]
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多肽难溶可以用弱酸弱碱调一下PH值, 实在不行,用DMSO溶也没什么问题,但最好能保证DMSO的体积不超过终体积的30%。我这边做了几千个多肽, 你要是能把多肽系列说出来, 我就能帮你分析一下
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66小飞侠[使用道具]
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多谢大家的帮助!我的多肽是公司已经和KLH偶联好的。我设立了一个含有DMSO的对照试验组,昨天免疫了小鼠,今天观察了皮毛和精神状态与其它组没有太大的区别,比较活跃。特别感谢musewuling,现在我勉强将其溶解分装并冻干了,如果在试验过程中遇到新的问题再麻烦您!
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8s5g[使用道具]
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我在公司就是做多肽KLH耦联的,其实耦联好的多肽溶解不掉是很正常的, 你用双蒸水溶解后的液体直接免疫动物,其实效价会很好的, 因为机体对固体颗粒的免疫效果比液体的更好。相反,你用DMSO溶解的时候,会破坏KLH的空间构象, 相反会降低它的免疫原性!
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