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标题:【讨论帖】Autophagy(自噬)

any333[使用道具]
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(一)自噬诱导剂
1)Bredeldin A / Thapsigargin / Tunicamycin :模拟内质网应激
2)Carbamazepine/ L-690,330/ Lithium Chloride(氯化锂):IMPase 抑制剂(即Inositol monophosphatase,肌醇单磷酸酶)
3)Earle's平衡盐溶液:制造饥饿
4)N-Acetyl-D-sphingosine(C2-ceramide):Class I PI3K Pathway抑制剂
5)Rapamycin:mTOR抑制剂
6)Xestospongin B/C:IP3R阻滞剂
问题:自噬诱导中,制造饥饿能不能用无血清培养基代替Earle's平衡盐溶液?多谢
不能。因为培养液中有氨基酸。血清的有效成分主要是各种蛋白和多肽以及其他生物活性物质。
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queen[使用道具]
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太好了 本来还以为是孤军奋战!我刚开始研究生实验 想问下版主 关于ATG9这个基因编码的是个跨膜蛋白 它运输膜物质到PAS 楼主认为会有哪些基因影响ATG9的运输呢?还有 对于研究ATG9运输机制的探索有什么好的建议吗?
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sigma的Anti-LC3B antibody produced in rabbit (1) L7543,做western很好,而且效价很高,可以重复使用很多次。
不过压LC3湿转的话,220毫安左右,转膜时间不要超过2小时。
这个western貌似很有trick啊 大家还有啥建议的吗
包括提蛋白 谢谢
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请问,sigma的6-Amino-3-methylpurine就是3-MA吗?
是啊,同问,请问各位都是多少钱订的呢?多谢
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一般EBSS处理3个小时就可以了,不过好像和细胞类型有关,有的细胞可能需要较长的时间,我的推测可能是因为各个细胞的自噬水平不一样的,还要自己摸条件。一般LC3抗体对LC3II型特异性较高,所以会出现两条带,LC3检测不是只看I型和II型,而是看两者比值的变化情况。检测细胞自噬应该多种方法一起检测,推荐用透射电镜观察,最直观可靠。

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请问只用透射电镜观察得到的结果可靠吗?有哪位同志已经做过电镜的?能否指点一下啊
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mamamiya[使用道具]
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我是研究凋亡的 但是电镜观察到很多不好解释的现象 可能与自噬有关
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gogo[使用道具]
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自是抑制剂3-MA在哪家公司买啊?SIGMA的好像挺贵,有没有用过的?请哪位大虾指教一下,太贵的怕最后做不出老板不答应
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any333[使用道具]
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不知有人用过3-MA抑制动物自噬的吗?怎么用?3-MA用于细胞培养倒是不少啊。谢
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831226[使用道具]
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请教:有没有人做植物方面关于自噬的呢?3-MA的浓度怎么来控制呢?
谢谢前辈们来指导!
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蒲公英[使用道具]
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请问,sigma的6-Amino-3-methylpurine就是3-MA吗?
是啊,同问,请问各位都是多少钱订的呢?多谢

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我刚定了3-MA,1400多
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