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标题:【讨论帖】Autophagy（自噬）

wiwi[使用道具]
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发表于 2016-4-14 11:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这周刚看到一篇关于自噬的文章，里面有种细胞Saos-2 TetOn PUMA-inducible没弄明白干什么用的，希望前辈解惑，谢谢
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发表于 2016-4-14 12:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
自噬小体的增多有两种可能：一是形成增加即自噬被诱导；另外一种是自噬体成熟受抑即自噬体不能和溶酶体结合。该怎么来判断呢？
另外，我们在神经系统中检测LCⅡ，使用western blotting，好像不怎么灵敏，还是因为它存在的时间较短？
自噬体增多，也就是“自噬潮”出现的原因一是形成增多，二是与溶酶体融合受阻（如使用了氢化氯喹或氯喹，另外，溶酶体的酶抑制剂和质子泵抑制剂的使用亦有可能影响溶酶体与自噬体或异噬泡的融合），使自噬体不能降解而积聚，这种积聚造成的自噬体增多的效应要大于自噬体诱导剂效应的数倍之多。
鉴于这样的原因，单纯的GFP-LC3荧光斑点增多不足以作为自噬激活的证据，可联用多个方法来判断：
1）加用自噬体与溶酶体融合的抑制剂，如氯喹，观察自噬潮的变化。
2）或加用LC3和溶酶体示踪物在荧光显微镜下观察共定位情况。
3）或Knockdown掉LAMP-2基因（溶酶体膜蛋白）。
4）检测胞浆长寿蛋白的降解。
Western Blot检测LC3时除了上述的原因外，还有几个需考虑到的地方：
1）抗体的亲和力：有报道认为LC3抗体对II型LC3的亲和力较高
2）结合于自噬体内层膜的LC3-II在与溶酶体结合后被降解。
3）自噬过程很快，一个自噬体从产生到降解仅需2~3个小时或更短，其中自噬体形成阶段更迅速，数分钟即可完成，而溶酶体降解阶段耗时相对较长。因此，设置多个检测时间点（time frame）是非常重要的。
学习ing
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发表于 2016-4-14 12:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这周刚看到一篇关于自噬的文章，里面有种细胞Saos-2 TetOn PUMA-inducible没弄明白干什么用的，希望前辈解惑，谢谢

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简单说就是一个条件表达系统
TetOn系统：在四环素衍生物doxycyclin存在的情况下，基因表达。——所载的基因毒性较大时最有用
TetOff系统：在四环素衍生物doxycyclin存在的情况下，基因不表达——所载的基因很重要时最有用
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发表于 2016-4-14 12:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼主，能否建立一个AUTOPHAGY的群啊，或者我们做这个方向的能有个什么组织，以方便交流。
另外，我们学校没有买Autophagy杂志，所以不能下载autophagy上的文章。
那位兄弟能有什么好方法，感谢交流推荐。
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发表于 2016-4-14 12:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
楼主，建个***吧，有关autophagy的，大家可以相互学习啊呵呵
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发表于 2016-4-14 12:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问：有没有关于兔子的自噬相关基因抗体？
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发表于 2016-4-14 14:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
学习了，高手们的见地就是不一样，希望斑竹能搞个细胞死亡方式的汇总，比如说坏死、凋亡、自体吞噬及entosis等各种死亡方式的比较，我第一个支持啊！
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发表于 2016-4-14 14:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有个问题, 根据战友的解释. (我还没有具体查过文献) 自噬似乎只是在胞浆发生的一系列变化. 与细胞核相关的讨论似乎从未见过, 在图中, 细胞核也只是被孤令令的摆在一个不起眼的位置, 任凭胞浆内是多么的热闹. 难道细胞核内确实没有任何变化吗? 还是目前没有人研究而被忽略了呢?
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发表于 2016-4-14 14:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 wiwi 于 2016-4-14 14:15 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
有个问题, 根据战友的解释. (我还没有具体查过文献) 自噬似乎只是在胞浆发生的一系列变化. 与细胞核相关的讨论似乎从未见过, 在图中, 细胞核也只是被孤令令的摆在一个不起眼的位置, 任凭胞浆内是多么的热闹. 难道细 ...

问得好！
细胞核在任何时候都是不能忽视的，只是目前对自噬的研究刚刚重视，对核的功能研究较少，但已经有人在做了。
若从自噬调控的角度，包括参与自噬过程本身的各种蛋白的合成和自噬上游和下游的信号传递，都需要细胞核的参与。因为自噬相关蛋白大部分都是可诱导蛋白，自噬被诱导时需从头转录和翻译，其中某些蛋白的翻译可能还受miRNA的调控。本人对此亦感兴趣，欢迎继续讨论和交流。
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发表于 2016-4-14 14:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
是呀, 除了蛋白的表达调控. 个人猜想在能量缺失的过程下, 细胞核的功能, 形态, 染色质或DNA的分布也应该会有一定的分子和形态学上的变化. 正如调亡时有染色质凝聚, DNA剪切这些变化一样. 只是未必会这么剧烈.
请问现在确实没人做过自噬中DNA是个什么状态吗? 应该不难吧.
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