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标题:【讨论帖】Autophagy（自噬）

boom[使用道具]
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发表于 2016-4-14 14:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
本人最近就在做自噬，用EBSS处理细胞9hr，发现EBSS处理的细胞大量漂起，WB检测LC3I-LC3II的变化，发现对照组两条带都有，而EBSS组只有LC3II的条带。该如何解释？另外我用别的细胞以一种药物处理，本来想看看该药物是否能诱导自噬发生的，结果却发现是对照和处理组都有两条条带，是否说明自噬用LC3检测假阳性率很高？我用的是SIGMA的anti－LC3B的抗体
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发表于 2016-4-14 14:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
重新审视细胞器的结构和若干细胞器纵横交错构成的功能也许是一个趋势。细胞器系统研究对下是蛋白质，核酸等生物大分子执行功能的具体结构，向上是组成细胞这个基本的生物学功能单位的基础。
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发表于 2016-4-14 14:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
大家说得都太好了,原来做自噬的能人也这么多啊
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发表于 2016-4-14 14:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

cuturl('http://www.nibs.ac.cn/?act=view&id=2081')
2009年4月08日，我所张宏实验室在《Autophagy》杂志上在线发表题为“Selective autophagic degradation of maternally-derived germline P granule components in somatic cells in C. elegans ”的文章。
2009年4月08日，我所张宏实验室在《Autophagy》杂志上在线发表题为“Selective autophagic degradation of maternally-derived germline P granule components in somatic cells in C. elegans ”的文章。
该文章指出在早期胚胎分裂过程中，残留在体细胞胞质中的有聚集倾向的P颗粒成分PGL-1和PGL-3通过自体吞噬作用被清除掉。包括VPS-34/BEC-1复合体在内的自体吞噬相关蛋白失去功能后会导致体细胞中PGL-1和PGL-3聚集形成PGL颗粒。这种PGL颗粒的形成是由SEPA-1介导的。这种自体吞噬介导的选择性降解蛋白聚合体在线虫发育过程中有重要的生理作用。
赵玉为该文章的第一作者，论文的其他作者还有本所的田娥。张宏博士为本文的通讯作者。该项研究由科技部863项目资助，在北京生命科学研究所完成
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发表于 2016-4-14 14:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

Autophagy enhances the presentation of endogenous viral antigens on MHC class I molecules during HSV-1 infection
NATURE IMMUNOLOGY ,2009,March
作者推测包裹HSV的自噬体膜来源于核膜
Figure 1. HSV-1 induces the formation of autophagosome-like structures
from the nuclear envelopes of infected macrophages.


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发表于 2016-4-14 14:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
Figure 2. The four-layered membrane structures that emerge from the nuclear envelope have autophagosome-like features.


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发表于 2016-4-14 14:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
作者推测包裹HSV的自噬体膜来源于核膜

=======================================================================

关于自噬体膜的来源一直都没有搞清楚，这是新的提法，找全文看看作者的证据是什么？
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芙蓉宫主[使用道具]
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发表于 2016-4-14 14:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
站友们做westen 都用哪个公司的抗体, 自噬的抗体哪个公司的质量最好?
最近我订了ABGENT公司的一个LC-3怎么没做出来?
到底是因为抗体质量问题,还是动物种属差异?
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发表于 2016-4-14 14:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 芙蓉宫主 于 2016-4-14 14:27 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
站友们做westen 都用哪个公司的抗体, 自噬的抗体哪个公司的质量最好?
最近我订了ABGENT公司的一个LC-3怎么没做出来?
到底是因为抗体质量问题,还是动物种属差异? ...

我使用过NOVUS的抗体，感觉还不错，也使用过CST的抗体，效果不行，也是没做过来，看说明书，好像不同细胞系有不同的差别，但是LC3好像是进化保守的，不知道为什么会有这么大的差异。
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redbutterfly[使用道具]
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发表于 2016-4-14 14:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 boom 于 2016-4-14 14:17 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
本人最近就在做自噬，用EBSS处理细胞9hr，发现EBSS处理的细胞大量漂起，WB检测LC3I-LC3II的变化，发现对照组两条带都有，而EBSS组只有LC3II的条带。该如何解释？另外我用别的细胞以一种药物处理，本来想看看该药物是否能诱导自噬发 ...

一般EBSS处理3个小时就可以了，不过好像和细胞类型有关，有的细胞可能需要较长的时间，我的推测可能是因为各个细胞的自噬水平不一样的，还要自己摸条件。一般LC3抗体对LC3II型特异性较高，所以会出现两条带，LC3检测不是只看I型和II型，而是看两者比值的变化情况。检测细胞自噬应该多种方法一起检测，推荐用透射电镜观察，最直观可靠。
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