【求助】粒电泳结果条带很多，请各位高手帮忙分析一下

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标题:【求助】粒电泳结果条带很多，请各位高手帮忙分析一下

dadaai[使用道具]
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发表于 2016-4-16 11:20 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我刚做TA克隆，用的是promega的T vector试剂盒，连接片段为1.8kb，载体3kb，连接后质粒电泳结果条带很多，请各位高手帮忙分析一下，marker从上到下分别是10000, 8000, 6000, 5000, 4000, 3500, 3000, 2500, 2000, 1500, 1000, 750, 500, 250.

huali[使用道具]
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发表于 2016-4-16 11:20 资料个人空间短消息加为好友

小中大

【回复】

连接不用电泳检测的，连接就是应该随机连接，所以片段就是很多很乱

今生如此[使用道具]
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发表于 2016-4-16 11:21 资料个人空间短消息加为好友

小中大

【回复】

连接完不用电泳了，直接转化就行，然后挑克隆鉴定就可以了！

xgy412[使用道具]
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发表于 2016-4-16 11:21 资料个人空间短消息加为好友

小中大

【回复】

我们连接都用5ul体系，如果每个都检测，promega公司会高兴死的

钻石[使用道具]
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发表于 2016-4-16 11:22 资料个人空间短消息加为好友

小中大

【回复】

谢谢各位了,是我没说清楚,是连接后转化后挑白斑然后摇菌提质粒的电泳结果!

886爱[使用道具]
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发表于 2016-4-16 11:22 资料个人空间短消息加为好友

小中大

【回复】

那就是做的过程中出现了污染，你酶切一下看看，如果不对就还是重新做吧

xgy412[使用道具]
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发表于 2016-4-16 11:22 资料个人空间短消息加为好友

小中大

【回复】

出现这种结果有以下几种原因：
一，质粒提取的效果不好，三种状态的质粒同时存在，如果细菌染色体的 DNA没有除掉，也可能出现拖尾的条带
二，挑斑时可能挑的不是单克隆菌落
解决方案：
重新挑取单克隆菌落，然后用PCR 或酶切鉴定

wawa11[使用道具]
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发表于 2016-4-16 11:23 资料个人空间短消息加为好友

小中大

【回复】

很大的可能是挑取的不是单克隆菌落

美人鱼[使用道具]
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发表于 2016-4-16 11:23 资料个人空间短消息加为好友

小中大

【回复】

我觉得很大可能是你挑取的不是单克隆，重新挑取单克隆试试吧，祝你好运