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标题:【求助】利用质谱原理对单细胞进行多参数检测的流式技术

兔子[使用道具]
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【求助】利用质谱原理对单细胞进行多参数检测的流式技术

质谱流式细胞技术(Mass Cytometry)是利用质谱原理对单细胞进行多参数检测的流式技术。它继承了传统流式细胞仪的高速分析的特点,又具有质谱检测的高分辨能力,是流式细胞技术一个新的发展方向。
传统的流式技术主要基于对荧光发射光谱的检测,但是荧光基团发射光谱一般比较宽,其间往往会发生重叠。一方面限制了检测通道的数量(<20个);另一方面,它会带来严重的串色问题,很多通道的信号需要复杂的补偿计算。


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zouyou[使用道具]
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【回复】

和传统荧光流式检测的荧光发射信号相比,质谱流式细胞仪的信号有了质的飞跃。
为了解决这些问题,质谱流式技术应运而生。与传统流式细胞技术相比,其主要有两点改进:第一、标签系统的不同,前者主要使用各种荧光基团作为抗体的标签,后者则使用各种金属元素作为标签;第二、检测系统的不同,前者使用激光器和光电倍增管作为检测手段,而后者使用ICP质谱技术作为检测手段。通过这些改进,质谱流式技术巧妙的实现了更多参数的检测。
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【回复】

用金属标签抗体标记的细胞进入质谱流式细胞仪后,依次通过ICP质谱检测装置,然后对每个细胞中各种金属标签进行定量检测,从而得到每个细胞中各目标蛋白的含量。
技术特点:
由于利用ICP质谱作为检测手段,与传统流式细胞技术相比,质谱流式细胞技术具有以下特点:
第一、通道数量增加到上百个
质谱流式细胞仪中的ICP质谱装置具有非常宽的原子量检测范围(88~210Da),因此可以对单个细胞同时检测上百个不同的参数。
第二、通道间无干扰,无需计算补偿
ICP质谱具有超高的分辨能力,可以完全区分用来标记的各种元素。实验数据表明,相邻通道间的干扰<0.3%,基本可以忽略不计,无需计算补偿。这样不仅使实验流程得到简化,也节约了标本和试剂。
第三、金属标签数量多,并具有极低的背景
用来作为标签的金属元素在细胞中的含量极低,而金属标签与细胞组分的非特异性结合能力极低,所以信号的背景极低。
目前用来标记抗体的金属标签有30多种,随着技术进步,更多元素可以用来作为标签,种类会进一步增加。
第四、多样化的数据处理方式,实现对样品的深入分析。
质谱流式细胞仪通道数量的激增带来信息量的成倍增长。传统的流式分析方法已经不能完全满足需要,所以需要对数据进行各种降维处理,提取出其中包含的有用的生物学信息。常用的分析方法有:SPADE、PCA、viSNE以及Gemstone等。
应用领域:
质谱流式细胞技术可以实现对细胞群体进行精准的免疫分型,对细胞内信号传导网络进行全面的分析,分析细胞亚群之间的功能联系,以及对于大量样品的高通量多参数检测。在造血、免疫、干细胞、癌症以及药物筛选等多个领域的研究有着广泛的应用前景。
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daomei[使用道具]
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通过对13个核心表面抗原和18个辅助抗原表达情况的分析,对人骨髓细胞群进行高精度的分型,全景展示了骨髓各系不同分化阶段细胞的具体组成。
发展现状:
目前,质谱流式技术还处于起步阶段,美国DVS Sciences公司研发的质谱流式细胞仪已经发展到第二代,即CyTOF2 质谱流式细胞仪(CyTOF2 Mass Cytometer)。
截至2013年9月,在国外质谱流式细胞仪的装机量已经达到50余台;而在国内,质谱流式这项技术已经由东胜创新的技术人员积极普及中。
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小熊妮妮[使用道具]
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【回复】

有搞头,阑系元素在药筛检测标记上已经广泛使用了,TRF的特点尤其适合检测。
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【回复】

这项技术发展很快,商品化的仪器已经发展到第二代(CyTOF2)了。其生产商是美国一家叫DVS Sciences的公司,这个月刚刚被Fluidigm并购。随着新资金的注入,估计又会有一轮新的发展。
在中国代理这个产品的是东胜,去年在一次学会上听了他们的介绍,印象很深刻。
这是他们的产品网页:
cuturl('http://www.eastwin.com.cn/product_show_11.html')
据我老板讲目前只有厦门大学有一台,不过我估计其他地区很快就会出现。
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qinqinai[使用道具]
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【回复】

流式发展几十年了,基本的原理变化不大,向BD、Beckman的流式均属此类。看楼主的介绍,质谱流式基于完全不同的原理,克服了传统流式串色的问题,这可是我们这些补偿菜鸟的福音啊。不知道什么时候可以用的上。
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hcy517[使用道具]
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非常感谢普及新知识!
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