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1.首先得脱盐
大量的无机盐的存在会干扰层析,包括凝胶过滤等分离手段的使用,甚至会对药理试验产生影响。很多在生物化学试验中使用的脱盐方法,在分离海洋天然产物,有其是小分子化合物时并不适应,当目标产物的分子大小与无机盐相差不大时,使用生物化学试验中常用的凝胶或者膜时,效果并不是很好,如果目标产物在甲醇中溶解并稳定,可将提取物,最好是冷冻干燥后的提取物浸泡在甲醇中抽提多次,只要的处理可以去掉大部分的无机盐。从小分子溶液中脱盐或是分离分子量接近的小分子,可以使用经典的葡聚糖凝胶sephadex G-10,G-15或bio-Gel-P2凝胶,这些凝胶通常可以将小分子目标产物和盐小心的分开。
另外,吸附树酯XAD-2,XAD-7,聚乙烯粉,聚丙烯粉等也可以使用,有时采用活性碳吸附再粗提取时也是一个有效的选择。
2.分段
如果目标产物只占提取物的一部分,则应该进行分段。
(1)根据分子大小进行分离,使用各种凝胶过滤和膜过滤,包括超虑、纳滤等技术通常会是一个很好的选择。如sephadex LH-20对不论是小极性还是大极性的化合物都是一个非常有效的初步分离手段。
(2)采用离子交换层析分离,如果已经知道目标产物的离子特性以及其在离子交换树酯上,洗脱液中的稳定性的话,可采用离子交换的方法对分离水溶性天然产物是一个很有效的选择。应该注意的是,很多化合物在强酸性阳离子或强碱性阴离子树酯上不够稳定,同样在较极端的pH洗脱液中也不够稳定,常常导致其分解。
(3)采用反相柱,具有各种疏水性固定相的反相柱现在用途很广,结合适当的流动相,如甲醇、水、乙腈、四氢呋喃和各种缓冲液等几乎可以用来分离各种极性范围的化合物。
(4)使用多孔性基质。在高压或中压下进行色谱分析,现在已经发展出出很多效果更好可以取代传统的C18或C8的色谱柱,它们的多孔性基质同时具有分子筛的过滤特性以及吸附特性,并且可以承受较高的压力,如TSH-125,TSK-250,TSK-400.
(5)离子交换和分子排阻层析相结合,经典的例子是在生物化学试验中使用的DEAE葡聚糖和羧甲基纤维素,在试剂使用中有三个原则要相互配合,即离子特性、分子大小和亲水/疏水相互作用。
希望对楼主有用,回宿舍睡觉啦,晚个安