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标题:【分享】细菌数量的测定方法

malong[使用道具]
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【分享】细菌数量的测定方法

1、计数器测定法:
  即用血细胞计数器进行计数。取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数器的计数室内,用显微镜观察计数。由于计数室的容积是一定的(O.1mm3),因而根据计数器刻度内的细菌数,可计算样品中的含菌数。本法简便易行,可立即得出结果。
  本法不仅适于细菌计数,也适用于酵母菌及霉菌孢子计数。
  2、电子计数器计数法:
  电子计数器的工作原理是测定小孔中液体的电阻变化,小孔仅能通过一个细胞,当一个细胞通过这个小孔时,电阻明显增加,形成一个脉冲,自动记录在电子记录装置上。
  该法测定结果较准确,但它只识别颗粒大小,而不能区分是否为细菌。因此,要求菌悬液中不含任何碎片。
  3、活细胞计数法
  常用的有平板菌落计数法,是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的。取一定容量的菌悬液,作一系列的倍比稀释,然后将定量的稀释液进行平板培养,根据培养出的菌落数,可算出培养物中的活菌数。此法灵敏度高,是一种检测污染活菌数的方法,也是目前国际上许多国家所采用的方法。使用该法应注意:①一般选取菌落数在30~300之间的平板进行计数,过多或过少均不准确;②为了防止菌落蔓延,影响计数,可在培养基中加入O.001%2,3,5一氯化三苯基四氮唑(TTC);③本法限用于形成菌落的微生物。
  广泛应用于水、牛奶、食物、药品等各种材料的细菌检验,是最常用的活菌计数法。 
  4、比浊法
  比浊法是根据菌悬液的透光量间接地测定细菌的数量。细菌悬浮液的浓度在一定范围内与透光度成反比,与光密度成正比,所以,可用光电比色计测定菌液,用光密度(OD值)表示样品菌液浓度。
  此法简便快捷,但只能检测含有大量细菌的悬浮液,得出相对的细菌数目,对颜色太深的样品,不能用此法测定。
  5、测定细胞重量法
  此法分为湿重法和干重法。湿重法系单位体积培养物经离心后将湿菌体进行称重;干重法系单位体积培养物经离心后,以清水洗净放人干燥器加热烘干,使之失去水分然后称重。
  此法适于菌体浓度较高的样品,是测定丝状真菌生长量的一种常用方法。
  6、测定细胞总氮量或总碳量
  氮、碳是细胞的主要成分,含量较稳定,测定氮、碳的含量可以推知细胞的质量。此法适于细胞浓度较高的样品。
7、颜色改变单位法(colour change unit,简称CCU)
这种方法通常用于很小,用一般的比浊法无法计数的微生物,比如支原体等,因为支原体的液体培养物是完全透明的,呈现为清亮透明红色,因此无法用比浊法来计数,由于支原体固体培养很困难,用cfu法也不容易计数,因此需要用特殊的计数方法,即CCU法。它是以微生物在培养基中的代谢活力为指标,来计数微生物的相对含量的,下面以解脲脲原体为例,简单介绍其操作:
(1).取12只无菌试管,每一管装1.8ml解脲脲原体培养基。
(2).在第一管加入0.2ml待测解脲脲原体菌液,充分混匀,从中吸取0.2ml加入第二管,依次类推,10倍梯度稀释,一直到最末一管
(3).于37度培养,以培养基颜色改变的最末一管作为待测菌液的CCU,也就是支原体的最大代谢活力,比如第六管出现颜色改变,他的相对浓度就是10的6次方CCU/ml.
一般来说,比浊法和菌落计数法就可以满足绝大多数细菌的计数,但是对支原体这样比较特殊的微生物,用CCU法比较合适。
  测定微生物生长的方法很多,各种方法均有其优缺点,也不是在任何情况下都适用。在微生物学工作中一般常用的是平皿菌落计数法、计数器法和比浊法。至于哪种方法比较适合你,得根据你的具体条件而定。
细菌数量
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PP熊[使用道具]
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【回复】

我现在有个实验,要求测混悬液中颗粒的浓度,颗粒粒径范围在0.2~150um,想从两方面测定,一方面:测每毫升中含颗粒数;二方面,每毫升中含颗粒质量。请问大侠能用那些方法测定,希望能详细介绍下,菜鸟在这里谢过了。
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jishiben[使用道具]
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【回复】

测质量用过滤法啊 ,测数目在显微镜下数一数.
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malong[使用道具]
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【回复】

谢谢,1um以下的颗粒怎么计数了?
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美人鱼[使用道具]
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【回复】

在显微镜下计数,请问是否有计数板之类的工具,能否详细介绍下?或介绍下什么资料里有这方面内容?
颗粒计数器的范围一般在1um以上,请问什么地方有1um以下的颗粒计数器?哪方面专业会有使用,谢谢!!!
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efp[使用道具]
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【回复】

取一定体积(如0.01ml)放在显微镜下面看看里面有多少颗粒是不是可以啊 ?小的颗粒可以用的大一点的物镜啊 ,放大不就可以说了啊 。
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钻石[使用道具]
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【回复】

这个我试了,理论上可以,但在1000倍时计数难度很大,准确性也不高,我还使用了image pro plus,对于1um以下的很差
再请教下测光密度是什么?谢谢哈,有什么用,原理
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xiaoxiaoai[使用道具]
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【回复】

这个我试了,理论上可以,但在1000倍时计数难度很大,准确性也不高,我还使用了image pro plus,对于1um以下的很差
你用的是什么显微镜啊,连在电脑上面的我觉得竖起来容易一点!
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跳跳哈里[使用道具]
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【回复】

我用的是LEICA的带光源显微镜,带数码相机,1000倍用的是油镜,可以和外界隔离,防止外界干扰。用的图像分析软件是image pro plus6.0
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