小中大【回复】
这个实验师兄以前做过了的,DMSO加入后不会出现那个奇怪的峰,而且DMSO也不会参与这个反应啊,我是重复师兄以前做过的实验,流动相和体系都是按照师兄的来的,我在想这个会不会因为我的流动相里面的有机相含量太低,水分含量太高,结果把柱子里面的填料给冲出来了啊?
C18的柱子流动相里面的水的含量最低能是多少啊?
我这个反应体系确实是图一中峰1、2是酶反应底物,1+2---->峰3,但是反应10分钟后,我用沸水煮了10分钟,使酶失活终止反应了,所以按道理,这个反应不能继续进行了。
关于图2,为什么加DMSO,是因为我要加入酶抑制剂,看抑制剂的抑制效果,而那些小分子抑制剂都是溶解在DMSO里面的,加入DMSO或者抑制剂后,这个大峰就出现了。
这个问题我一直不知道是为什么,因为我换柱子后,这个大峰就消失了,我只能认为是柱子的原因,因为我用的是伊力特C18的柱子,这个柱子的流动相里面有机相含量最好是不能少于10%的,而我的流动相里面的有机相几乎为0,因为加入有机相后几个峰会连在一起而分不开,所以只能减少有机相的含量,现在用的是安捷伦TC-C18(2)的柱子,流动相里面加入了5%的甲醇,虽然能做出来,但是重复性不是很好,我这个星期实验了再和大家交流下啊。