拉曼光谱

生物模板上组装了金纳米粒子，审稿意见是让补测个拉曼 证明一下金粒子确实是在生物模板上。于是做了拉曼。
在514nm下进行的拉曼 基本上没有峰，而且基线飘移的很凶。怀疑是被荧光干扰，所以换作1064nm做了傅立叶拉曼，就是上传的这个图了。
金纳米粒子的直径在10-20nm之间。
生物分子作为对照 做了个拉曼 还不错，
然后做了一个在生物分子上附着了纳米金粒子的样品的拉曼光谱，峰基本上都没了，这是怎么回事啊？第一次做拉曼，请高手指教，应该怎么做呢？或者应该怎么分析呢？
图如下：（红色的是生物分子本身，黑色的是附着脸纳米金粒子的拉曼）

拉曼光谱啊 拉曼光谱  :tiger26: 让人吐血的拉曼

请问为什么作拉曼可以 证明一下金粒子确实是在生物模板上？？？

这是审稿人的意见 我也没有弄太明白，如果有键合的话 应该会有拉曼的变化的吧。查了很多关于拉曼的文献 没有看到这么做的。但因为不是太懂 也不敢贸然驳回审稿人的意见，纠结。。。。

如果我理解正确的话，审稿人的意见是让你采用SERS的方法来证明你的纳米粒子在生物模板上面。也就是说，吸附了纳米金粒子之后得到的Raman光谱要比你由单纯的生物模板的得到的拉曼要强。这个就是说，吸附了金纳米粒子之后的生物模板的Raman峰的强度要强于没有吸附金纳米粒子的生物模板的Raman峰。
从你的光谱里面，只是看出了Raman的counts确实增强了很多，但是没有观测到你的生物模板的信息。是不是你的激光功率太高了？要不就是你的纳米粒子太多了，以至于完全盖住了你的生物模板。另外，你有没有测量一下UV-vis？你的纳米粒子的吸收峰在多少nm？然后根据这个选择一下别的波长的激光。祝你好运！

谢谢回贴！！终于等到有人回复啦！那个感激涕零啊！
不过有几个问题，请您赐教：
1.SERS一般不是都需要探针分子的吗？就是一些大的有机分子。不是任何有机物都可以作为SERS的探针分子的吧？
2.测试紫外可见的吸收峰位置在530nm左右，首次做拉曼选择的激光波长为514.5nm，但是非常悲哀的没有任何信息，初步怀疑是荧光所致。图上传如下。
3.1064nm下测试的功率为0.12W，不算太大了吧，装了两次样，结果都如此。
4.还有一个问题想请教：在1064nm下重复实验，液体样品（严格来说是悬浊液）应该怎么制样呢？
再次感谢，金币将在交流结束时一并奉送！

不好意思，上面那个挂了，下面这是在514.5nm下进行的拉曼测试图

不过有几个问题，请您赐教：
1.SERS一般不是都需要探针分子的吗？就是一些大的有机分子。不是任何有机物都可以作为SERS的探针分子的吧？
你说得对，是需要探针分子，但是我个人认为，那是为了证明SERS的存在。比如说可以增强多少倍。使用很灵敏的探针分子， 很稀的浓度。我觉得你的生物分子也可以作为探针分子，只不过就是增强倍数的问题。
2.测试紫外可见的吸收峰位置在530nm左右，首次做拉曼选择的激光波长为514.5nm，但是非常悲哀的没有任何信息，初步怀疑是荧光所致。图上传如下。
看见了，是荧光很强。
3.1064nm下测试的功率为0.12W，不算太大了吧，装了两次样，结果都如此。
这个已经不小了。通常用的是几个mW，你这都已经120mW了。样品估计被烧焦了！不过我不清楚这个波长的激光是不是很大，没有使用过。我使用514和635的激光的时候，都是几个mW，有的时候是0点几个mW。
4.还有一个问题想请教：在1064nm下重复实验，液体样品（严格来说是悬浊液）应该怎么制样呢？
直接测量应该就可以吧，找一个玻璃管装完液体之后封闭，直接测量就行了。或者不用那么麻烦，把溶液装载烧杯或者表面皿里面，使用10x的镜头，不要让镜头接触到液面。

就楼主的问题来看，由于生物分子紫外吸收在530左右，所以荧光太强，看不见峰。但改成1064也有问题，就是1064激发光的能量太弱，再加上又无法共聚焦，同样也会测不出分子，这一点不奇怪。如果你能用1064测出生物分子，那基本上785也没问题，那你的文章就不会投这个期刊，就不会有这个审稿人了。因为要证明这个不必非得做SERS,除非你的题目就就是这方面的。
另外，为什么不做633呢，正常金都是做633的。但是象楼上所讲，光的能量不能太强，对于生物分子而言，到达样品的能量也就是100微瓦左右，否则会把样品烧掉的，就像你那上面那么大的碳化包。

回复楼上，0.12W在1064中几乎是最小的了，这个能量倒不是太大，因为它没有共聚焦。但需要积分的次数和时间很长，所以容易烧焦样品。
对于浑浊液体，如果短时间内不会沉积，你可以把样品仓里的样品杆卸了，然后用一块泡沫挖个洞，把比色皿放在里面，光滑的一面朝外，然后移动泡沫手动对焦。白光下头伸进去，看那几个光点什么位置聚在一起就是最佳位置。不知可否，楼主可以试一次，共同学习。