小中大发射光谱相差20nm是指2台仪器的发射峰扫描有 20nm位移吗?
你可以先排除样品的变化,在两台仪器上多次反复扫描样品,看扫描图谱是否一致,如有条件也可再配一次样品看看。
在确定样品没有问题后,再讨论仪器是否正常,有个比较简单的测试方法,我们可以作水的拉曼散射实验,激发波长调至365nm扫描,在发射波长414nm可以得到拉曼散射,如果2台仪器的结果都在414nm附近,可以认为波长基本没大问题。否则可能要仪器工厂检修了。
你的这个实验,对于未做过仪器能量归一化的荧光分光光度计,确实可能有一定波长位移 ,尤其是对于发射光谱宽的样品。
荧光发射光谱一般都很宽,有几十甚至上百纳米,如果你的样品扫描峰很宽,峰值位置不很明显(比如在荧光峰附近30-50nm范围,荧光值都差不多大)。不同仪器能量不一致就显得很突出。
在红光区影响更大的原因是,荧光分光光度计的光电检测器采用光电倍增管(PMT)为多,光电倍僧管在红外的衰减非常大,器件在此区域的一致性较差。所以,在红光区(一般在650以后)仪器若不做归一化,一致性确实会比较差。其实,对于分光光度计,在波长的两端,一致性都是会差点的